【摘要】：目的:為構(gòu)建減毒鼠傷寒沙門菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系統(tǒng),并將其開發(fā)為能夠穩(wěn)定攜帶外源基因的活疫苗載體。方法:利用重組自殺性質(zhì)粒(pREΔasd)介導(dǎo)的等位基因交換技術(shù),以減毒鼠傷寒沙門菌株SL1344Δsse K1為親本株,運(yùn)用二步法篩選asd基因缺失株SL1344Δsse K1Δasd。將攜帶有asd基因的無抗性p YA3493質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至上述缺失菌株SL1344Δsse K1Δasd,構(gòu)建SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)重組菌株。結(jié)果:PCR及測(cè)序結(jié)果表明SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)構(gòu)建成功。進(jìn)一步研究表明重組菌株SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)血清型和強(qiáng)毒株SL1344及親本株SL1344Δsse K1相同,且能穩(wěn)定遺傳缺失后的asd基因;其生化特性和生長(zhǎng)速度與強(qiáng)毒株SL1344及親本株SL1344Δsse K1相比均無明顯差異。小鼠毒力試驗(yàn)表明,SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)口服感染6周齡BALB/c小鼠的LD50為5.24×108CFU,毒力較強(qiáng)毒株SL1344約下降至0.048%;免疫保護(hù)效力試驗(yàn)顯示,運(yùn)用鼠傷寒沙門菌野生毒株對(duì)免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保護(hù)率,與親本株SL1344Δsse K1基本一致。結(jié)論:以上結(jié)果表明,鼠傷寒沙門菌分泌性蛋白K1缺失株宿主-載體平衡致死系統(tǒng)構(gòu)建成功,且遺傳穩(wěn)定,毒力明顯降低,具有較好的免疫原性,為深入研究以鼠傷寒沙門菌為載體的口服多價(jià)疫苗奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct a balanced lethal system of attenuated Salmonella typhimurium secretory protein K1 deletion strain and develop it into a live vaccine vector which can stably carry foreign genes. Methods: SL1344 螖 sse K1 螖 asd. strain SL1344 螖 sse K1 螖 asd. was screened by two-step method using attenuated Salmonella typhimurium strain SL1344 螖 sse K1 as parent strain mediated by recombinant suicide plasmid (PRE 螖 ASD). The non-resistant p YA3493 plasmid carrying asd gene was transferred to the deleted strain SL1344 螖 sse K1 螖 asd, to construct the recombinant strain SL1344 螖 sse K1 螖 ASD (p YA3493). Results: the results of PCR and sequencing showed that SL1344 螖 sse K1 螖 ASD (p YA3493) was successfully constructed. Further studies showed that the serotype of recombinant strain SL1344 螖 sse K1 螖 ASD (p YA3493) was the same as that of virulent strain SL1344 and its parent strain SL1344 螖 sse K1, and it could stabilize the asd gene after genetic deletion, and its biochemical characteristics and growth rate were not significantly different from those of virulent strain SL1344 and parent strain SL1344 螖 sse K1. The virulence test of mice showed that the LD50 of 6-week-old BALB/c mice infected with SL1344 螖 sse K1 螖 ASD (p YA3493) was 5.24 脳 108 CFU, and the virulence strain SL1344 decreased to 0.048%, and the protective effect of Salmonella typhimurium wild strain on mice on the 17th day after immunization was 62.5%, which was basically consistent with that of its parent strain SL1344 螖 sse K1. Conclusion: the above results show that the host-vector balanced lethal system of Salmonella typhimurium secretory protein K1 deletion strain has been successfully constructed, and its genetic stability is stable, its toxicity is obviously reduced, and it has good immunogenicity, which lays a foundation for further study of oral multivalent vaccine with Salmonella typhimurium as carrier.
【作者單位】： 河南科技大學(xué)動(dòng)物疫病與公共衛(wèi)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/洛陽市活載體生物材料與動(dòng)物疫病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(112102110019)資助
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2501431