【摘要】：T細(xì)胞免疫在腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用�；罨腃D8+T細(xì)胞能夠分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞毒顆粒,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。然而CD8+T淋巴細(xì)胞識(shí)別腫瘤抗原受人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類分子(HLA-Ⅰ)的限制。特異性CD8+T淋巴細(xì)胞的活化必須首先利用T細(xì)胞抗原受體識(shí)別抗原遞呈細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的HLA-Ⅰ類分子遞呈的抗原肽,獲得活化的第一信號(hào),然后通過共刺激分子受體和配體的結(jié)合獲得第二信號(hào)。腫瘤過繼免疫治療通常采用自體抗原遞呈細(xì)胞活化T細(xì)胞,但自體抗原遞呈細(xì)胞制備耗時(shí)費(fèi)力,且費(fèi)用昂貴,限制了其在臨床的運(yùn)用。而人工抗原提呈細(xì)胞(artificial antigen presenting cell, aAPC)克服了這些缺點(diǎn),具有易培養(yǎng)、活化條件易控制、T細(xì)胞活化增殖周期短等優(yōu)點(diǎn),故近年來對人工抗原提呈細(xì)胞的研究日趨活躍。 我們實(shí)驗(yàn)室前期已經(jīng)成功構(gòu)建了一個(gè)單鏈三聚體(single chain trimer, SCT)重組融合基因,由MHCI分子的基因片段以適當(dāng)?shù)慕宇^(linker)串聯(lián)在一起。在本研究中,我們選用的MHC-Ⅰ類分子為HLA-A*0201,抗原表位為PR1(VLQELNVTV)。PR1是人類髓系白血病的腫瘤相關(guān)抗原蛋白酶3中的一條HLA-A*0201限制性的、強(qiáng)免疫原性多肽,誘生的PR1特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)具有顯著抗髓系白血病作用。 本課題將利用慢病毒載體將該新型的PR1-SCT基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至本實(shí)驗(yàn)室前期制備的具有多克隆刺激能力的人工抗原遞呈細(xì)胞(artificial antigen-presenting cells, aAPC)K562/CD86細(xì)胞株,使其成為一個(gè)既能向抗原特異性CD8+T細(xì)胞提供共刺激信號(hào)(即第二信號(hào)),又能通過MHC分子同時(shí)向CD8+細(xì)胞提供特異性抗原肽的信號(hào)(即第一信號(hào))的人工抗原遞呈細(xì)胞。 我們首先利用基因工程技術(shù)將PR1-SCT重組融合基因克隆至慢病毒載體系統(tǒng)表達(dá)質(zhì)粒中,測序正確后將慢病毒載體系統(tǒng)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞,收獲細(xì)胞培養(yǎng)上清,得到具有一次感染能力而無復(fù)制能力的假型病毒；再用該假型病毒感染前期制備的缺少第一信號(hào)分子的K562/CD86細(xì)胞,通過抗生素篩選和流式分選技術(shù),分選獲得CD86和HLA-A0201高表達(dá)的K562/CD86/PR1-HLA-A*0201-SCT(91%),并用Western Blot從蛋白水平進(jìn)一步驗(yàn)證；接著將分離好的外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMCs)與絲裂霉素C處理后的人工抗原遞呈細(xì)胞K562/CD86/PR1-HLA-A*0201-SCT進(jìn)行體外混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng),多輪刺激后用商品化PRl特異性五聚體檢測PR1特異性CTL的頻率,驗(yàn)證人工抗原遞呈細(xì)胞的特異性刺激能力。 本實(shí)驗(yàn)研究制備的能提供雙信號(hào)的人工抗原遞呈細(xì)胞,建立了一個(gè)人工抗原遞呈細(xì)胞平臺(tái),為髓系白血病的過繼性免疫治療奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:T cell immunity plays an important role in tumor immunity. Activated CD8 T cells can secrete cytokines and cytotoxicity particles to induce apoptosis of tumor cells. However, the recognition of tumor antigens by CD8 T lymphocytes is limited by human leukocyte antigen class I molecules (HLA- 鈪，

本文編號(hào)：2497365