【摘要】：T細胞免疫在腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用�；罨腃D8+T細胞能夠分泌細胞因子和細胞毒顆粒,誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。然而CD8+T淋巴細胞識別腫瘤抗原受人類白細胞抗原Ⅰ類分子(HLA-Ⅰ)的限制。特異性CD8+T淋巴細胞的活化必須首先利用T細胞抗原受體識別抗原遞呈細胞或腫瘤細胞表面表達的HLA-Ⅰ類分子遞呈的抗原肽,獲得活化的第一信號,然后通過共刺激分子受體和配體的結(jié)合獲得第二信號。腫瘤過繼免疫治療通常采用自體抗原遞呈細胞活化T細胞,但自體抗原遞呈細胞制備耗時費力,且費用昂貴,限制了其在臨床的運用。而人工抗原提呈細胞(artificial antigen presenting cell, aAPC)克服了這些缺點,具有易培養(yǎng)、活化條件易控制、T細胞活化增殖周期短等優(yōu)點,故近年來對人工抗原提呈細胞的研究日趨活躍。 我們實驗室前期已經(jīng)成功構(gòu)建了一個單鏈三聚體(single chain trimer, SCT)重組融合基因,由MHCI分子的基因片段以適當(dāng)?shù)慕宇^(linker)串聯(lián)在一起。在本研究中,我們選用的MHC-Ⅰ類分子為HLA-A*0201,抗原表位為PR1(VLQELNVTV)。PR1是人類髓系白血病的腫瘤相關(guān)抗原蛋白酶3中的一條HLA-A*0201限制性的、強免疫原性多肽,誘生的PR1特異性細胞毒性T細胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)具有顯著抗髓系白血病作用。 本課題將利用慢病毒載體將該新型的PR1-SCT基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至本實驗室前期制備的具有多克隆刺激能力的人工抗原遞呈細胞(artificial antigen-presenting cells, aAPC)K562/CD86細胞株,使其成為一個既能向抗原特異性CD8+T細胞提供共刺激信號(即第二信號),又能通過MHC分子同時向CD8+細胞提供特異性抗原肽的信號(即第一信號)的人工抗原遞呈細胞。 我們首先利用基因工程技術(shù)將PR1-SCT重組融合基因克隆至慢病毒載體系統(tǒng)表達質(zhì)粒中,測序正確后將慢病毒載體系統(tǒng)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T包裝細胞,收獲細胞培養(yǎng)上清,得到具有一次感染能力而無復(fù)制能力的假型病毒；再用該假型病毒感染前期制備的缺少第一信號分子的K562/CD86細胞,通過抗生素篩選和流式分選技術(shù),分選獲得CD86和HLA-A0201高表達的K562/CD86/PR1-HLA-A*0201-SCT(91%),并用Western Blot從蛋白水平進一步驗證；接著將分離好的外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMCs)與絲裂霉素C處理后的人工抗原遞呈細胞K562/CD86/PR1-HLA-A*0201-SCT進行體外混合淋巴細胞培養(yǎng),多輪刺激后用商品化PRl特異性五聚體檢測PR1特異性CTL的頻率,驗證人工抗原遞呈細胞的特異性刺激能力。 本實驗研究制備的能提供雙信號的人工抗原遞呈細胞,建立了一個人工抗原遞呈細胞平臺,為髓系白血病的過繼性免疫治療奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:T cell immunity plays an important role in tumor immunity. Activated CD8 T cells can secrete cytokines and cytotoxicity particles to induce apoptosis of tumor cells. However, the recognition of tumor antigens by CD8 T lymphocytes is limited by human leukocyte antigen class I molecules (HLA- 鈪，

本文編號：2497365