【摘要】：目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌rBCG-Rv2029c重組疫苗并鑒定。方法通過PCR擴增Rv2029c抗原編碼基因,然后用雙酶切法將Rv2029c和pMV261質(zhì)粒酶切,再將酶切產(chǎn)物連接成rpMV261-2029c重組質(zhì)粒,用電穿孔法將該質(zhì)粒導(dǎo)入BCG中構(gòu)建成rBCG-Rv2029c重組疫苗,最后用SDS-PAGE和Western blotting鑒定表達(dá)的重組蛋白。結(jié)果通過PCR成功擴增出1 020bp的Rv2029c基因,插入到pMV261質(zhì)粒中,再把融合基因成功導(dǎo)入BCG中,經(jīng)雙酶切及基因比對鑒定證實,再通過熱誘導(dǎo)后用Western blotting顯示重組蛋白具有免疫原性。結(jié)論成功構(gòu)建了結(jié)核分枝桿菌rBCG-Rv2029c重組活疫苗,為重組疫苗的免疫機制研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct and identify rBCG-Rv2029c recombinant vaccine of Mycobacterium tuberculosis. Methods the Rv2029c antigen coding gene was amplified by PCR, then the Rv2029c and pMV261 plasmids were digested by double enzyme digestion, and then the digested products were ligated into rpMV261-2029c recombinant plasmid, and the plasmid was introduced into BCG to construct rBCG-Rv2029c recombinant vaccine by electroporation. Finally, the expressed recombinant protein was identified by SDS-PAGE and Western blotting. Results the 1 020bp Rv2029c gene was successfully amplified by PCR and inserted into pMV261 plasmid, and then the fusion gene was successfully introduced into BCG. It was confirmed by double enzyme digestion and gene comparison that the recombinant protein had immunogenicity by Western blotting after heat induction. Conclusion the recombinant live vaccine of Mycobacterium tuberculosis rBCG-Rv2029c was successfully constructed, which laid a foundation for the study of the immune mechanism of the recombinant vaccine.
【作者單位】： 南陽醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部;河南大學(xué)附屬南陽南石醫(yī)院;
【基金】：校自科NYYZ006~~
【分類號】：R392

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本文編號：2496110