【摘要】：目的：探討血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)對過氧化氫(hygrogen peroxide, H2O2)氧化損傷的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AEC-Ⅱ)凋亡的影響,研究其對細(xì)胞線粒體的作用。 方法：26只健康雄性SD大鼠,均予腹腔麻醉、氣管插管、開胸取肺,分離提純AEC-Ⅱ,將細(xì)胞以1×106個／ml接種于培養(yǎng)板,原代培養(yǎng)24 h,將細(xì)胞隨機(jī)分為四組：正常組,H202組,HO-1組,HO-1抑制組(鋅原卟啉Ⅸ)。采用H202(0.5mmol/L)損傷AEC-Ⅱ,復(fù)制活性氧(Reactive oxygen species, ROS)攻擊損傷體內(nèi)AEC-Ⅱ細(xì)胞的情況,建立急性肺損傷(acute lung injury, ALI)細(xì)胞模型；用HO-1 (0.2μmol/L)或鋅原卟啉Ⅸ(20μmol/L)進(jìn)行細(xì)胞外直接干預(yù)。電鏡鑒定AEC-Ⅱ,熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,流式細(xì)胞儀檢測線粒體跨膜電位去極化的比例,蛋白印跡法(Western blotting)檢測線粒體相關(guān)蛋白Bcl-2、p53表達(dá)的變化。 結(jié)果：電鏡下鑒定可見AEC-Ⅱ的特征性結(jié)構(gòu)：細(xì)胞表面很多長短不一粗細(xì)不等的微絨毛,胞漿內(nèi)數(shù)量不等、大小不一、不同成熟階段的嗜鋨性板層小體(見圖1)。熒光顯微鏡檢測：與正常組比較,H202組、HO-1抑制組均可見大量呈綠色、紅色熒光的凋亡細(xì)胞；HO-1組所見熒光細(xì)胞明顯減少(見圖3)。流式細(xì)胞儀檢測：與正常組比較,H202組、HO-1抑制組細(xì)胞凋亡率增加(P0.05),且隨H202作用時間的延長細(xì)胞凋亡率增加；線粒體跨膜電位去極化的比例降低(P0.05)。與H202組比較,HO-1組AEC-Ⅱ細(xì)胞凋亡率明顯降低(P0.05)；線粒體跨膜電位去極化的比例升高(P0.05)。Western blotting法：與正常組比較,HO-1組Bcl-2表達(dá)明顯增強(qiáng)、p53表達(dá)減弱,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；與HO-1組比較,H202組、HO-1抑制組Bcl-2表達(dá)減弱而p53表達(dá)明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：HO-1降低H202氧化損傷AEC-11細(xì)胞凋亡率,其穩(wěn)定線粒體跨膜電位并調(diào)控線粒體相關(guān)蛋白Bcl-2、p53的表達(dá)可能參與HO-1抗凋亡作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of heme oxygenase-1 (heme oxygenase-1, HO-1) on apoptosis of alveolar type 鈪，

本文編號：2482496