【摘要】：目的利用同源重組技術(shù)構(gòu)建金黃色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突變株,探究psmα缺失對(duì)金黃色葡萄球菌蛋白表達(dá)的影響。方法分別擴(kuò)增psmα基因的上下游同源臂,根據(jù)同源重組原理,構(gòu)建p BT2基因打靶載體,利用同源重組技術(shù),構(gòu)建psmα缺失的Newman突變株。并對(duì)野生株和突變株培養(yǎng)上清蛋白進(jìn)行研究。結(jié)果突變株培養(yǎng)上清中一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量約為135×103的蛋白表達(dá)水平較野生株明顯減少甚至缺失;質(zhì)譜分析提示該蛋白為金黃色葡萄球菌atl A基因編碼的雙功能自溶素前體蛋白(Atl A蛋白);實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示psmα基因敲除株atl A基因的轉(zhuǎn)錄水平較野生株顯著降低。結(jié)論 psmα缺失后能夠降低atl A基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。
[Abstract]:Objective to construct Staphylococcus aureus Newman psm 偽 gene deletion mutant by homologous recombination technique and to explore the effect of psm 偽 deletion on the expression of Staphylococcus aureus protein. Methods the upstream and downstream homologous arms of psm 偽 gene were amplified respectively. according to the principle of homologous recombination, the targeting vector of p BT2 gene was constructed, and the Newman mutant with psm 偽 deletion was constructed by homologous recombination technique. The culture albumin of wild and mutant strains was studied. Results the expression level of a protein with a relative molecular weight of 135 脳 103 in the culture medium of the mutant strain was significantly lower than that of the wild strain. Mass spectrometry analysis showed that the protein was a bifunctional autolysin precursor protein (Atl A encoded by Staphylococcus aureus atl A gene. Real-time fluorescence quantitative PCR showed that the transcription level of atl A gene in psm 偽 knockout strain was significantly lower than that in wild strain. Conclusion psm 偽 deletion can decrease the transcriptional expression of atl A gene.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部微生物學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31470241,31570127) 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃(201690031002)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R378.11

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本文編號(hào)：2482224