【摘要】：目的：構(gòu)建ADAMTS-5siRNA慢病毒載體，研究慢病毒載體介導(dǎo)的siRNA對(duì)大鼠離體軟骨細(xì)胞中ADAMTS-5基因表達(dá)的影響。 方法：針對(duì)ADAMTS-5基因RNAi有效靶點(diǎn)構(gòu)建大鼠pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA表達(dá)質(zhì)粒，使用慢病毒包裝系統(tǒng)，在293T細(xì)胞中進(jìn)行包裝生產(chǎn)含ADAMTS-5siRNA的慢病毒顆粒，然后轉(zhuǎn)導(dǎo)入大鼠軟骨細(xì)胞。通過(guò)real-time PCR和Westernblot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)后軟骨細(xì)胞ADAMTS-5基因mRNA及蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：成功包裝大鼠含ADAMTS-5siRNA慢病毒顆粒。ADAMTS-5siRNA能順利轉(zhuǎn)入軟骨細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率為80%；從Real-time PCR結(jié)果可以看出，大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中ADAMTS-5mRNA的表達(dá)量，干擾組明顯低于陰性對(duì)照組，差異有顯著性意義（P0.05）,Western blot結(jié)果顯示， ADAMTS-5蛋白表達(dá)量，干擾組低于陰性對(duì)照組，差異有顯著性意義（P0.05）。 結(jié)論：利用慢病毒載體把ADAMTS-5siRNA轉(zhuǎn)入大鼠軟骨細(xì)胞，，使軟骨細(xì)胞的ADAMTS-5基因沉默，為進(jìn)一步闡明siRNA沉默ADAMTS-5基因防治骨關(guān)節(jié)炎的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct ADAMTS-5siRNA lentivirus vector and study the effect of lentivirus vector mediated siRNA on the expression of ADAMTS-5 gene in rat cartilage cells in vitro. Methods: rat pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA expression plasmid was constructed according to the effective target of ADAMTS-5 gene RNAi. Lentivirus packaging system was used to produce lentivirus particles containing ADAMTS-5siRNA in 293T cells, and then transferred into rat cartilage cells. The expression of ADAMTS-5 gene mRNA and protein in cartilage cells was detected by real-time PCR and Westernblot. Results: the rat containing ADAMTS-5siRNA lentivirus particles was successfully packaged. ADAMTS-5siRNA could be transferred into cartilage cells successfully, and the transfer rate was 80%. From the results of Real-time PCR, the expression of ADAMTS-5mRNA in rat articular cartilage cells was significantly lower in the interference group than in the negative control group (P 0.05), Western blot). The expression of ADAMTS-5 protein in the interference group was significantly lower than that in the negative control group. The interference group was lower than the negative control group, the difference was significant (P0.05). Conclusion: ADAMTS-5siRNA was transferred into rat cartilage cells by lentivirus vector, and the ADAMTS-5 gene of cartilage cells was silenced, which provided a basis for further elucidating the molecular mechanism of siRNA silencing ADAMTS-5 gene in the prevention and treatment of osteoarthritis.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R684.3;R3416

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本文編號(hào)：2473847