【摘要】：目的:探討肝豆湯調(diào)控毒牛奶(TX)小鼠肝細(xì)胞內(nèi)銅轉(zhuǎn)運通路的分子靶點并觀察其相應(yīng)的調(diào)控機(jī)制。方法:20只家兔適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后,隨機(jī)分為空白組(生理鹽水)和肝豆湯組(4.5 g·kg-1·d~(-1)),每日2次ig,連續(xù)10 d,制得含藥血清;采用2步灌注法分離提取DL,TX小鼠肝細(xì)胞,采用原子吸收法檢測加含不同百分含量(5%,10%,15%,20%)含肝豆湯兔血清作用24 h后,對TX小鼠肝細(xì)胞內(nèi)微量元素的影響,另設(shè)空白組;蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)法檢測經(jīng)含肝豆湯兔血清作用后腺嘌呤核苷三磷酸7b(adenosine triphosphate7b,ATP7b),抗氧化蛋白1(anti-oxidant1,ATOX1),銅轉(zhuǎn)運體1(copper transporter1,CTR1),金屬巰蛋白(metallothionein,MT),超氧化劑物歧化酶銅伴侶蛋白(copper chaperone of superoxide dismutase,CCS),細(xì)胞色素氧化酶17(cytochrome-coxidase17,COX17)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:與空白組比較,模型組TX小鼠肝細(xì)胞內(nèi)銅含量升高,鋅含量降低,鐵含量升高,ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表達(dá)明顯降低,CTR1,MT蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01);與模型組比較,含肝豆湯兔血清可顯著降低TX小鼠肝細(xì)胞內(nèi)銅含量,增加鋅含量,降低鐵含量(P0.05,P0.01);Western blot檢測結(jié)果顯示,含肝豆湯兔血清可明顯增加ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表達(dá)(P0.05,P0.01),降低CTR1,MT蛋白表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:肝豆湯可能是通過調(diào)控細(xì)胞內(nèi)銅代謝相關(guān)蛋白,上調(diào)ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表達(dá),抑制CTR1,MT表達(dá),從而發(fā)揮細(xì)胞內(nèi)排銅作用。肝豆湯可通過多靶點、多途徑調(diào)控銅代謝通路達(dá)到降低肝細(xì)胞內(nèi)銅含量的治療效果。
[Abstract]:Aim: to investigate the molecular target of Gantou decoction regulating copper transport pathway in hepatocytes of toxic milk (TX) mice and to observe its corresponding regulatory mechanism. Methods: after 3 days of adaptive feeding, 20 rabbits were randomly divided into blank group (saline) and Gantou decoction group (4.5g kg- 1 路d ~ (- 1), twice a day for 10 days) to prepare drug-containing serum. The hepatocytes of DL,TX mice were isolated and extracted by two-step perfusion method. The contents of rabbit serum containing different percentage (5%, 10%, 15%, 20%) were detected by atomic absorption spectrometry (AAS) for 24 hours. The effect of trace elements in hepatocytes of TX mice was set up in the blank group. Western blot (Western blot) assay for detection of adenine nucleoside triphosphate 7b (adenosine triphosphate7b,ATP7b), antioxidant protein 1 (anti-oxidant1,ATOX1), copper transporter 1 (copper transporter1,CTR1) and metallomercapto protein (metallothionein,) in rabbit serum containing Gantou decoction Expression of MT), superoxidant SOD copper chaperone (copper chaperone of superoxide dismutase,CCS and cytochrome oxidase 17 (cytochrome-coxidase17,COX17) protein. Results: compared with the blank group, the content of Cu, Zn, Fe, ATP7b,ATOX1,CCS,COX17 protein and CTR1,MT protein in the model group of TX mice were higher than those in the control group (P 0.01), while the content of iron in the liver cells of the model group was lower than that of the control group (P0.01). Compared with the model group, the serum of rabbits containing Gandou decoction could significantly decrease the content of copper, increase the content of zinc and decrease the content of iron in the hepatocytes of TX mice (P0.05, P01). The results of Western blot showed that the serum containing Gantou decoction could significantly increase the expression of ATP7b,ATOX1,CCS,COX17 protein (P0.05, P01) and decrease the expression of CTR1,MT protein (P0.01). Conclusion: Gantou decoction may up-regulate the expression of ATP7b,ATOX1,CCS,COX17 protein and inhibit the expression of CTR1,MT by regulating intracellular copper metabolism related proteins, so as to play the role of intracellular copper excretion. Gantou decoction can reduce the content of copper in hepatocytes through multi-target and multi-channel regulation of copper metabolism pathway.
【作者單位】： 安徽中醫(yī)藥大學(xué)神經(jīng)病學(xué)研究所附屬醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81473535,81173212)
【分類號】：R-332;R277.7

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本文編號：2473543