【摘要】：目的:探討超聲微泡介導pGPU6/Neo質粒轉染大鼠NSCs的最優(yōu)參數(shù)。 方法:以一定能量的超聲介導質粒轉染大鼠NSCs,分為:空白組、pGPU6/Neo質粒組、pGPU6/Neo質粒+微泡組、pGPU6/Neo質粒+超聲組、pGPU6/Neo質粒+微泡+超聲組,并按不同轉染條件分為亞組。轉染48 h后熒光顯微鏡觀察轉染效率,臺盼藍染色法檢測細胞活性。 結果:最優(yōu)參數(shù)為聲強1.0 W/cm~2,輻照時間30 s時,超聲微泡介導質粒轉染率最高,且對細胞活性無明顯影響。超聲微泡介導質粒對NSCs的轉染效率,明顯高于其他實驗組(P0.05)。 結論:在超聲聲強為1.0 W/cm~2,輻照時間30 s的條件下,超聲微泡造影劑能夠安全、有效地介導基因轉染NSCs。 目的:探討超聲微泡介導pNogo-R shRNA轉染大鼠NSCs的有效率及可行性,同時評估UMMD聯(lián)合脂質體提高基因轉染效率的協(xié)同作用。 方法:NSCs自清潔級SD新生大鼠分離獲得,以不同的方式轉染培養(yǎng)至第三代的NSCs,分為:A.空白組、B.陰性質粒+超聲微泡組、C. pNogo-R shRNA質粒+超聲微泡組、D. pNogo-R shRNA質粒+脂質體組、E. pNogo-R shRNA質粒+超聲微泡+脂質體組。 結果:熒光顯微鏡觀測結果顯示,E組轉染效率明顯高于其他實驗組,而C組與D組間無顯著差異;同時,臺盼藍染色法顯示,與其他組相比較,超聲微泡聯(lián)合脂質體組對細胞活性影響無顯著差異;轉染24小時后,E組Nogo-R的蛋白及mRNA表達水平明顯低于其他組別(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。 結論:本研究結果表明,超聲微泡聯(lián)合脂質體的基因轉染為一非侵襲性轉染方法,對細胞活性影響小,具有一定可行性。超聲微泡和脂質體的聯(lián)合作用能增強pNogo-R shRNA質粒轉染NSCs,這種聯(lián)合轉染方式為NSCs轉基因治療提供了一種新方法。
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【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【參考文獻】

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本文編號：2471187