【摘要】：目的:探討超聲微泡介導(dǎo)pGPU6/Neo質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠NSCs的最優(yōu)參數(shù)。 方法:以一定能量的超聲介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠NSCs,分為:空白組、pGPU6/Neo質(zhì)粒組、pGPU6/Neo質(zhì)粒+微泡組、pGPU6/Neo質(zhì)粒+超聲組、pGPU6/Neo質(zhì)粒+微泡+超聲組,并按不同轉(zhuǎn)染條件分為亞組。轉(zhuǎn)染48 h后熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞活性。 結(jié)果:最優(yōu)參數(shù)為聲強(qiáng)1.0 W/cm~2,輻照時(shí)間30 s時(shí),超聲微泡介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率最高,且對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯影響。超聲微泡介導(dǎo)質(zhì)粒對(duì)NSCs的轉(zhuǎn)染效率,明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組(P0.05)。 結(jié)論:在超聲聲強(qiáng)為1.0 W/cm~2,輻照時(shí)間30 s的條件下,超聲微泡造影劑能夠安全、有效地介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染NSCs。 目的:探討超聲微泡介導(dǎo)pNogo-R shRNA轉(zhuǎn)染大鼠NSCs的有效率及可行性,同時(shí)評(píng)估UMMD聯(lián)合脂質(zhì)體提高基因轉(zhuǎn)染效率的協(xié)同作用。 方法:NSCs自清潔級(jí)SD新生大鼠分離獲得,以不同的方式轉(zhuǎn)染培養(yǎng)至第三代的NSCs,分為:A.空白組、B.陰性質(zhì)粒+超聲微泡組、C. pNogo-R shRNA質(zhì)粒+超聲微泡組、D. pNogo-R shRNA質(zhì)粒+脂質(zhì)體組、E. pNogo-R shRNA質(zhì)粒+超聲微泡+脂質(zhì)體組。 結(jié)果:熒光顯微鏡觀測(cè)結(jié)果顯示,E組轉(zhuǎn)染效率明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組,而C組與D組間無(wú)顯著差異;同時(shí),臺(tái)盼藍(lán)染色法顯示,與其他組相比較,超聲微泡聯(lián)合脂質(zhì)體組對(duì)細(xì)胞活性影響無(wú)顯著差異;轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,E組Nogo-R的蛋白及mRNA表達(dá)水平明顯低于其他組別(P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論:本研究結(jié)果表明,超聲微泡聯(lián)合脂質(zhì)體的基因轉(zhuǎn)染為一非侵襲性轉(zhuǎn)染方法,對(duì)細(xì)胞活性影響小,具有一定可行性。超聲微泡和脂質(zhì)體的聯(lián)合作用能增強(qiáng)pNogo-R shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NSCs,這種聯(lián)合轉(zhuǎn)染方式為NSCs轉(zhuǎn)基因治療提供了一種新方法。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2471187