【摘要】：目的:探究全局性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子CodY在單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)鞭毛運(yùn)動(dòng)和細(xì)菌毒力方面的作用。方法:通過(guò)同源重組的方法敲除Lm染色體上CodY的編碼基因codY并成功構(gòu)建缺失菌株的回復(fù)菌株;利用平板泳動(dòng)法觀測(cè)鞭毛運(yùn)動(dòng)的變化,RT-qPCR檢測(cè)與鞭毛運(yùn)動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá);比較野生型菌株EGDe與CodY缺失菌株對(duì)細(xì)菌溶血活性、棉鈴蟲(chóng)幼蟲(chóng)的半致死劑量和主要的毒力因子LLO和毒力基因調(diào)控蛋白PrfA轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響。結(jié)果:同野生型菌株相比,CodY缺失菌株鞭毛運(yùn)動(dòng)和相關(guān)基因,以及主要的毒力因子LLO和PrfA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)顯著降低(P≤0.01),溶血活性顯著降低(P≤0.01),對(duì)棉鈴蟲(chóng)幼蟲(chóng)的半致死劑量上升了5.8倍。結(jié)論:CodY在Lm鞭毛運(yùn)動(dòng)和細(xì)菌毒力調(diào)控方面具有重要作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of global transcription regulator CodY in flagellum movement and virulence of Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes,Lm). Methods: the homologous recombination method was used to knock out the coding gene codY of CodY on the chromosome of Lm and successfully construct the replicating strain of the deleted strain. The changes of flagellum movement were observed by plate electrophoresis, and the transcriptional expression of genes related to flagellum movement was detected by RT-qPCR. The effects of wild strain EGDe and CodY deficient strain on the hemolytic activity of bacteria, the half lethal dose of Helicoverpa armigera larvae, the main virulence factor LLO and the transcriptional expression of virulence gene regulatory protein PrfA were compared. Results: compared with wild-type strains, the transcription and expression of flagellum movement and related genes, the main virulence factors LLO and PrfA, and hemolytic activity of CodY-deficient strains were significantly decreased (P < 0. 01), and the hemolytic activity was significantly lower than that of wild-type strains (P < 0. 01). The lethal dose to Helicoverpa armigera larvae increased 5.8 times. Conclusion: CodY plays an important role in flagellum movement and bacterial virulence regulation of Lm.
【作者單位】： 華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳調(diào)控與整合生物學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31571931) 華中師范大學(xué)中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(CCNU15A02026)資助項(xiàng)目
【分類(lèi)號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：2470147