【摘要】：[背景]：膽汁酸由膽固醇轉(zhuǎn)化而來,具有調(diào)節(jié)膽固醇代謝、促進(jìn)脂類的消化和吸收、防止膽石形成等重要作用,同時(shí)也具有一定的細(xì)胞毒性。胎兒肝臟在妊娠中期就能夠合成膽汁酸,但缺乏代謝能力。胎盤在母胎間膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮了重要作用。有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體OATPs在人類目前共有11個(gè)亞家族被確認(rèn)。多項(xiàng)研究表明胎盤中OATPs參與了母胎間膽汁酸的轉(zhuǎn)運(yùn),而其中OATP1B3可能在胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)功能上發(fā)揮主要作用。 [目的]：研究胎盤OATP1B3對兩種膽汁酸的轉(zhuǎn)運(yùn)作用,為ICP對胎兒危害機(jī)制探討、降低胎兒風(fēng)險(xiǎn)及新靶向藥物的研發(fā)提供潛在策略。 [方法]：用慢病毒載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)沉默OATP1B3的表達(dá),用Real-time PCR和Western blot檢測干擾效率；用MTT法檢測兩種膽汁酸對細(xì)胞的毒性作用；將正常的和干擾后的Swan細(xì)胞分別構(gòu)建體外單層滋養(yǎng)細(xì)胞屏障模型,運(yùn)用高效液相色譜技術(shù)檢測兩種膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)情況。 [結(jié)果]：(1)MTT法：GCA、GCDCA以10μmol/L、20μmol/L濃度作用24h對細(xì)胞無明顯毒性作用(P0.05)；(2)慢病毒載體介導(dǎo)的RNAi:a. Real-time PCR檢測干擾后mRNA表達(dá)下降了94.42%(P0.05)；b.Western blot檢測干擾后蛋白表達(dá)下降了49.51%(P0.05)；(3)成功構(gòu)建體外單層滋養(yǎng)細(xì)胞屏障模型：平臺期TEER值為31.90±1.47Ω；(4)膽汁酸底物轉(zhuǎn)運(yùn)檢測：正常組、陰性對照組、實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)運(yùn)曲線形態(tài)基本一致,均與空白組不同,實(shí)驗(yàn)組對GCA、GCDCA轉(zhuǎn)運(yùn)量明顯低于正常組和陰性對照組。在頂端側(cè)加入起始濃度的GCA/GCDCA,隨著時(shí)間變化,GCA/GCDCA逐漸從頂端側(cè)被轉(zhuǎn)運(yùn)至底端側(cè),當(dāng)?shù)锥藗?cè)的GCA/GCDCA濃度高于頂端側(cè)時(shí)呈現(xiàn)相反方向的轉(zhuǎn)運(yùn)。 [結(jié)論]：(1)GCA、 GCDCA在20μmol/L以下濃度24h內(nèi)對Swan細(xì)胞沒有明顯的毒性作用。(2)OATP1B3shRNA慢病毒介導(dǎo)的RNAi能特異性抑制Swan細(xì)胞OATP1B3mRNA和蛋白水平的表達(dá)。(3).人胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞系中OATP1B3對GCA、GCDCA的轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R321

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本文編號：2465041