【摘要】：白細(xì)胞介素1(interleukin 1,IL-1)是一個(gè)具有多種免疫調(diào)節(jié)功能、可以誘發(fā)炎性反應(yīng)以及機(jī)體防御反應(yīng)的炎性細(xì)胞因子。它可以活化T細(xì)胞(間接活化B細(xì)胞)、提高黏附分子表達(dá)、誘導(dǎo)一系列其它促炎性細(xì)胞因子以及炎性相關(guān)蛋白表達(dá),形成炎性反應(yīng)的放大級(jí)聯(lián)反應(yīng)。大量證據(jù)證明:在免疫和心理應(yīng)激后產(chǎn)生的促炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1(IL-1)在神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)和行為應(yīng)激反應(yīng)方面發(fā)揮著重要作用。特別是中樞系統(tǒng)產(chǎn)生的IL-1,它是應(yīng)激誘導(dǎo)的HPA軸的激活和糖皮質(zhì)激素分泌之間的重要聯(lián)結(jié),而糖皮質(zhì)激素在調(diào)節(jié)記憶功能和神經(jīng)可塑性上發(fā)揮著重要的影響,低濃度時(shí)發(fā)揮著有益的結(jié)果,高濃度時(shí)產(chǎn)生有害影響。此外,IL-1信號(hào)通路和糖皮質(zhì)激素分泌產(chǎn)物可以調(diào)節(jié)急性和慢性應(yīng)激引起的抑郁癥狀,通過(guò)抑制海馬神經(jīng)元發(fā)生改善抑郁癥狀。然而,在一些生理?xiàng)l件下,比如低水平的IL-1,可以促進(jìn)適應(yīng)性應(yīng)激反應(yīng),這些反應(yīng)是有益的,但是在一些嚴(yán)重或慢性應(yīng)激條件下,沉默或阻止IL-1可以作為一種預(yù)防性和治療性的手段去緩解一些神經(jīng)病理學(xué)和精神病理學(xué)疾病的問(wèn)題。 RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指外源或內(nèi)源性的短雙鏈RNA(dsRNA)進(jìn)入細(xì)胞后引起的同源mRNA的將解,從而特異性阻斷目的基因的表達(dá)。推測(cè)可能分為以下階段:首先雙鏈RNA在細(xì)胞內(nèi)被RNA酶III(Ribonuclase III,RNase III)酶切成約21~23nt的小片段干擾RNA(short interfering RNA,siRNA),siRNA與一些蛋白組裝形成siRNA-蛋白復(fù)合物,即RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complex,RISC)。在ATP存在的情況下,雙鏈的siRNA解旋,解旋后的siRNA反義鏈引導(dǎo)RISC到達(dá)靶mRNA,并與之結(jié)合將其降解。本研究通過(guò)構(gòu)建腺病毒介導(dǎo)的siRNA干擾載體,用于沉默IL-1β基因的表達(dá),為下一步基因功能和治療手段的研究奠定基礎(chǔ)。 目的:本研究通過(guò)構(gòu)建腺病毒介導(dǎo)IL-1βshRNA表達(dá)載體,來(lái)抑制IL-1β的表達(dá),以此探討IL-1β基因的功能與一些神經(jīng)病理學(xué)之間的關(guān)系。為腺病毒作為基因治療的載體提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:1.利用在線軟件設(shè)計(jì)特異性的IL-1β-siRNA寡核苷酸片段,在體外構(gòu)建和克隆重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-IL-1β-shRNA.2. PmeI酶切線性化轉(zhuǎn)化到感受態(tài)BJ5183pAdEasy-1中,進(jìn)行同源重組。3.篩選陽(yáng)性重組腺病毒載體Ad-IL-1β-shRNA,PacI酶切后轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞中包裝病毒顆粒,得到腺病毒。并在體外巨噬細(xì)胞中檢測(cè)沉默效率。4.將腺病毒注射入大鼠體內(nèi),觀察對(duì)大鼠體重和糖水偏嗜度的影響,并檢測(cè)大鼠組織中mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果:1.經(jīng)酶切和序列測(cè)序證明成功構(gòu)建了重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-IL-1β-shRNA 2.成功構(gòu)建了腺病毒載體Ad-IL-1β-shRNA并在HEK293細(xì)胞中完成了包裝。3.在體外,腺病毒1和腺病毒2感染巨噬細(xì)胞后,使其IL-1βmRNA表達(dá)水平明顯降低,分別下降了63%和72.2%。4.在體內(nèi),腺病毒注射后,大鼠體重略有下降,海馬組織中IL-1βmRNA的表達(dá)也稍微下降,但是與對(duì)照組之間無(wú)明顯的變化。
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【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 程杉;熊英;賀俊崎;;RNA干擾及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年01期

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本文編號(hào)：2464789