【摘要】：白細胞介素1(interleukin 1,IL-1)是一個具有多種免疫調(diào)節(jié)功能、可以誘發(fā)炎性反應以及機體防御反應的炎性細胞因子。它可以活化T細胞(間接活化B細胞)、提高黏附分子表達、誘導一系列其它促炎性細胞因子以及炎性相關(guān)蛋白表達,形成炎性反應的放大級聯(lián)反應。大量證據(jù)證明:在免疫和心理應激后產(chǎn)生的促炎癥細胞因子白細胞介素-1(IL-1)在神經(jīng)內(nèi)分泌學和行為應激反應方面發(fā)揮著重要作用。特別是中樞系統(tǒng)產(chǎn)生的IL-1,它是應激誘導的HPA軸的激活和糖皮質(zhì)激素分泌之間的重要聯(lián)結(jié),而糖皮質(zhì)激素在調(diào)節(jié)記憶功能和神經(jīng)可塑性上發(fā)揮著重要的影響,低濃度時發(fā)揮著有益的結(jié)果,高濃度時產(chǎn)生有害影響。此外,IL-1信號通路和糖皮質(zhì)激素分泌產(chǎn)物可以調(diào)節(jié)急性和慢性應激引起的抑郁癥狀,通過抑制海馬神經(jīng)元發(fā)生改善抑郁癥狀。然而,在一些生理條件下,比如低水平的IL-1,可以促進適應性應激反應,這些反應是有益的,但是在一些嚴重或慢性應激條件下,沉默或阻止IL-1可以作為一種預防性和治療性的手段去緩解一些神經(jīng)病理學和精神病理學疾病的問題。 RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指外源或內(nèi)源性的短雙鏈RNA(dsRNA)進入細胞后引起的同源mRNA的將解,從而特異性阻斷目的基因的表達。推測可能分為以下階段:首先雙鏈RNA在細胞內(nèi)被RNA酶III(Ribonuclase III,RNase III)酶切成約21~23nt的小片段干擾RNA(short interfering RNA,siRNA),siRNA與一些蛋白組裝形成siRNA-蛋白復合物,即RNA誘導沉默復合體(RNA-induced silencing complex,RISC)。在ATP存在的情況下,雙鏈的siRNA解旋,解旋后的siRNA反義鏈引導RISC到達靶mRNA,并與之結(jié)合將其降解。本研究通過構(gòu)建腺病毒介導的siRNA干擾載體,用于沉默IL-1β基因的表達,為下一步基因功能和治療手段的研究奠定基礎(chǔ)。 目的:本研究通過構(gòu)建腺病毒介導IL-1βshRNA表達載體,來抑制IL-1β的表達,以此探討IL-1β基因的功能與一些神經(jīng)病理學之間的關(guān)系。為腺病毒作為基因治療的載體提供理論和實驗依據(jù)。 方法:1.利用在線軟件設(shè)計特異性的IL-1β-siRNA寡核苷酸片段,在體外構(gòu)建和克隆重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-IL-1β-shRNA.2. PmeI酶切線性化轉(zhuǎn)化到感受態(tài)BJ5183pAdEasy-1中,進行同源重組。3.篩選陽性重組腺病毒載體Ad-IL-1β-shRNA,PacI酶切后轉(zhuǎn)染入HEK293細胞中包裝病毒顆粒,得到腺病毒。并在體外巨噬細胞中檢測沉默效率。4.將腺病毒注射入大鼠體內(nèi),觀察對大鼠體重和糖水偏嗜度的影響,并檢測大鼠組織中mRNA的表達水平。 結(jié)果:1.經(jīng)酶切和序列測序證明成功構(gòu)建了重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-IL-1β-shRNA 2.成功構(gòu)建了腺病毒載體Ad-IL-1β-shRNA并在HEK293細胞中完成了包裝。3.在體外,腺病毒1和腺病毒2感染巨噬細胞后,使其IL-1βmRNA表達水平明顯降低,分別下降了63%和72.2%。4.在體內(nèi),腺病毒注射后,大鼠體重略有下降,海馬組織中IL-1βmRNA的表達也稍微下降,但是與對照組之間無明顯的變化。
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【學位授予單位】：電子科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 程杉;熊英;賀俊崎;;RNA干擾及其在腫瘤研究中的應用[J];首都醫(yī)科大學學報;2008年01期

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本文編號：2464789