【摘要】：瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白(CSP)蛋白是平均分布在瘧原蟲子孢子上的一層表被蛋白,是惡性瘧原蟲子孢子時期的重要保護性抗原,也是瘧疾疫苗研究中的重要候選抗原之一。然而因該蛋白結(jié)構(gòu)復(fù)雜,至今尚無合適的蛋白合成系統(tǒng)表達(dá)和制備出理想的重組CSP作為瘧疾疫苗應(yīng)用。麥胚無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)屬于無細(xì)胞合成系統(tǒng)中的真核蛋白合成系統(tǒng),是不同于基于細(xì)胞的蛋白合成系統(tǒng)的一種新的蛋白合成體系,可克服迄今其他各種基因工程蛋白合成技術(shù)所存在的缺點,國外已有學(xué)者在進行使用麥胚無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)表達(dá)瘧原蟲蛋白的研究,已有文獻支持該系統(tǒng)在瘧原蟲蛋白的表達(dá)上具有獨有的優(yōu)越性,所以本課題運用該系統(tǒng)合成惡性瘧原蟲CSP,以探討其作為瘧疾疫苗的可行性和為新型瘧疾疫苗研究建立基礎(chǔ)。 目的:應(yīng)用麥胚無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)表達(dá)出具有生物活性的惡性瘧原蟲CS蛋白。 方法:依據(jù)PlasmoDB上查得的惡性虐原蟲Pf3D7株CSP基因序列,設(shè)計一對引物,經(jīng)PCR擴增出CSP基因全序列。用NcoI與SmaI DNA內(nèi)切酶雙酶切PCR產(chǎn)物后,與同樣雙酶切的pIVEX 1.3WG載體連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5а株,獲得pIVEX WG 1.3-CSP表達(dá)質(zhì)粒。常規(guī)方法對質(zhì)粒進行鑒定和DNA測序分析。將pIVEX WG 1.3-CSP質(zhì)粒加入到麥胚無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)進行表達(dá),優(yōu)化不同表達(dá)條件,對表達(dá)產(chǎn)物進行原蟲蛋白部分性狀鑒定與分析。 結(jié)果:PCR成功擴增出CSP基因序列;成功構(gòu)建了用于麥胚無細(xì)胞系統(tǒng)的pIVEX WG 1.3-CSP真核表達(dá)質(zhì)粒;該重組質(zhì)粒在麥胚無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)中成功地表達(dá)出了重組惡性瘧原蟲CS蛋白,經(jīng)鑒定,表達(dá)產(chǎn)物的可溶性為100%; 結(jié)論:使用麥胚無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)能夠表達(dá)出完全可溶的重組CS蛋白。但關(guān)于無細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá)的瘧疾重組蛋白質(zhì)的純化問題,尚需要進一步的研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2462964