【摘要】：目的探討竇房結(jié)促生長轉(zhuǎn)錄因子TBX18對乳鼠心臟成纖維細胞的重編程作用。方法構(gòu)建攜帶人TBX18基因的重組腺病毒載體(Ad-TBX18)及只帶有綠色熒光蛋白的腺病毒載體(Ad-GFP),轉(zhuǎn)染乳鼠心臟成纖維細胞(CFs),分成實驗組A(CFs-TBX18)、對照組B(CFs—GFP)和空白對照組C(CFs)。各組細胞培養(yǎng)8 d觀察形態(tài)學變化并檢測HCN4蛋白、Cox43蛋白及Cox45蛋白的表達情況;再檢測心肌肌鈣蛋白1(cTn1)蛋白的表達量并記錄細胞內(nèi)鈣火花的數(shù)量;最后檢測α-SMA蛋白的表達及Vimentin蛋白的熒光分布。結(jié)果成纖維細胞轉(zhuǎn)染Ad—GFPTBX18后其形態(tài)學和搏動功能均未向iSANs轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)染TBX18的成纖維細胞HCN4表達明顯增高,Cox43與Cox45蛋白表達下調(diào)。鈣火花檢測結(jié)果顯示,空白對照組細胞內(nèi)有鈣火花,而實驗組和對照組中均未發(fā)現(xiàn)鈣火花。cTn1蛋白檢測結(jié)果表明,實驗組中無cTn1蛋白表達。免疫熒光檢測顯示,各組中均有Vimentin蛋白的紅色熒光,實驗組中α-SMA高表達,而對照組α-SMA表達明顯降低。結(jié)論 CFs經(jīng)TBX18轉(zhuǎn)染后可重編程為高表達HCN4蛋白,和低表達COX43、45蛋白表達較低的肌成纖維細胞(MCFs)。
[Abstract]:Objective to investigate the reprogramming effect of sinoatrial node growth stimulating transcription factor (TBX18) on cardiac fibroblasts of neonatal rats. Methods Recombinant adenovirus vector (Ad-TBX18) carrying human TBX18 gene and adenovirus vector containing only green fluorescent protein (Ad-GFP) were constructed and transfected into neonatal rat cardiac fibroblasts (CFs),) and divided into experimental group A (CFs-TBX18). Control group B (CFs-GFP) and blank control group C (CFs). The morphological changes and the expression of HCN4 protein, Cox43 protein and Cox45 protein were observed in each group on the 8th day, then the expression of cardiac troponin 1 (cTn1) protein was detected and the number of calcium sparks in the cells was recorded. Finally, the expression of 偽-SMA protein and the fluorescence distribution of Vimentin protein were detected. Results the morphology and pulsatile function of fibroblasts transfected with Ad-GFPTBX18 were not transformed into iSANs. The expression of HCN4 was increased and the expression of Cox43 and Cox45 protein was down-regulated in fibroblasts transfected with TBX18. The results of calcium spark detection showed that there was no calcium spark in the blank control group, but no calcium spark was found in both the experimental group and the control group. The results of cTn1 protein detection showed that there was no expression of cTn1 protein in the experimental group. Immunofluorescence assay showed that there was red fluorescence of Vimentin protein in all groups. The expression of 偽-SMA in the experimental group was higher than that in the control group, but the expression of 偽-SMA in the control group was significantly decreased. Conclusion CFs can be reprogrammed into myoblasts with high expression of HCN4 protein and low expression of COX43,45 protein after transfection with TBX18, and the myoblasts with low expression of COX43,45 protein can be reprogrammed to express (MCFs).
【作者單位】： 武漢大學人民醫(yī)院心內(nèi)科/武漢大學心血管研究所/湖北省心血管重點實驗室;十堰市太和醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：湖北省科技支撐計劃項目(2013BCB013) 國家自然科學基金面上項目(81270249);國家自然科學基金面上項目(81570306)
【分類號】：R329.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 魏海峰;井玲;魏雁虹;劉輝;齊玲;趙志濤;張秀云;李才;;氟對二維和三維培養(yǎng)的成纖維細胞胰島素樣生長因子-1表達的影響[J];中國生物制品學雜志;2010年05期

2 陳春明;在淋巴細胞和成纖維細胞培養(yǎng)中脆性X染色體的表達——一種新的技術(shù)[J];國外醫(yī)學.遺傳學分冊;1982年05期

3 陳若澤;甘小敏;梁瑩;唐德思;莫肖敏;;成纖維細胞形態(tài)學變化的電鏡觀察[J];電子顯微學報;1988年03期

4 Ludmia ;胡子南;;用成纖維細胞培養(yǎng)檢查重金屬污染的牛組織[J];農(nóng)業(yè)環(huán)境與發(fā)展;1991年03期

5 唐展云,陳詩書;基因工程成纖維細胞的研究進展[J];生命的化學(中國生物化學會通訊);1997年01期

6 王偉銘,周同,姚建;成纖維細胞及其異質(zhì)性研究進展[J];生命科學;1997年03期

7 崔玉芳,楊紅,高亞兵,熊呈琦,夏國偉,王德文;5-羥色胺對正常和受照射成纖維細胞生長的影響[J];輻射研究與輻射工藝學報;1998年03期

8 劉濤;金巖;王新文;黃沙;姜玲;溫寧;;成纖維細胞上清提取物對成纖維細胞增殖遷移的影響[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2006年03期

9 劉瑞豐,張際緋,李月珍;成纖維細胞復合染料染色法[J];解剖學雜志;1997年04期

10 王丹茹,錢云良,許禮根,楊群;γ干擾素對創(chuàng)面成纖維細胞的生物學影響[J];中華醫(yī)學美容雜志;2000年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李繼坤;薛小平;楊秀竹;李東華;張艷萍;郭世鐸;;中藥調(diào)控成纖維細胞活性的實驗研究[A];第七屆全國中西醫(yī)結(jié)合普通外科臨床及基礎研究學術(shù)會議論文匯編[C];2001年

2 劉杰峰;趙超莉;龍忠恒;許幼文;謝挺;;抑瘢檫劑對成纖維細胞的生物學的作用[A];第八屆全國燒傷外科學年會論文匯編[C];2007年

3 陳若澤;甘小敏;梁瑩;唐德思;莫肖敏;;成纖維細胞形態(tài)學變化的電鏡觀察[A];第五次全國電子顯微學會議論文摘要集[C];1988年

4 楊慶;王興桂;李程;劉峰;陳波;;基本機械力學刺激對腧穴筋膜成纖維細胞力感受器分子整合素α1、α3亞基表達影響研究[A];中國針灸學會經(jīng)絡分會第十二屆全國針灸經(jīng)絡學術(shù)研討會論文集[C];2012年

5 劉定志;肖衡;杜成友;羅詩樵;;腫瘤上清液激活成纖維細胞后對血管內(nèi)皮生長因子-A表達影響[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

6 辛國華;羅旭;張友來;萬子楊;曾元臨;;改良五黃油對成纖維細胞生長增殖的影響[A];中華醫(yī)學會燒傷外科學分會2009年學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

7 李金璽;劉旭盛;唐輝;周新;黃躍生;;部分創(chuàng)面外用抗菌藥物與堿性成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、重組人生長激素對成纖維細胞生物學特性影響的實驗研究[A];第五屆全國燒傷救治專題研討會燒傷后臟器損害的臨床救治論文匯編[C];2007年

8 王春霞;曾煦欣;霍啟錄;侯連兵;;常通口服液對正常及粘連腹膜成纖維細胞周期的影響[A];2009年中國藥學大會暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

9 王春霞;曾煦欣;霍啟錄;侯連兵;;常通口服液對正常及粘連腹膜成纖維細胞周期的影響[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

10 梁洋;楊瑩;毛巍巍;安鐵洙;;4℃下保存的小鼠胎兒成纖維細胞傳代培養(yǎng)[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物解剖學及組織胚胎學分會第十四次學術(shù)研討會論文集[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前6條

1 本報記者 孟剛;幫你認識高機能水[N];中國消費者報;2009年

2 記者 劉海英;英發(fā)現(xiàn)成纖維細胞具有不同類型[N];科技日報;2013年

3 劉霞;美成功將成纖維細胞直接變?yōu)樾募〖毎鸞N];科技日報;2010年

4 胡其峰;世界首例胎兔體細胞克隆實驗獲成功[N];光明日報;2007年

5 鄒爭春　朱廣平;新型組織修復基因具有雙重作用[N];中國醫(yī)藥報;2011年

6 暨南大學醫(yī)藥生物技術(shù)研究開發(fā)中心 李校X 姚成燦;bFGF肌膚“裝修”揭秘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 莊卓男;整合素αVβ6與癌相關(guān)成纖維細胞的關(guān)系及惡性腫瘤細胞生物學行為研究[D];山東大學;2015年

2 簡天明;吡非尼酮抑制眼眶成纖維細胞應力纖維及粘著斑重構(gòu)作用和細胞功能的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

3 徐卓;成纖維細胞生長因子家族在腎臟疾病中的作用和機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2014年

4 屈紀富;合并全身放射損傷創(chuàng)傷局部成纖維細胞變化的機制與意義的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2001年

5 孟國林;成纖維細胞成骨能力的系列研究[D];第四軍醫(yī)大學;2000年

6 黃迪;腎衰保腎膠囊對小鼠腎成纖維細胞影響的實驗研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2006年

7 陳波;模擬毫針機械刺激誘導成纖維細胞壓力信號生物轉(zhuǎn)化作用與針刺效應的研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2005年

8 邊莉;云錫礦粉誘導人肺上皮細胞轉(zhuǎn)化、成纖維細胞活化過程中的相互作用及其機制[D];昆明醫(yī)學院;2008年

9 范桄溥;藥物抑制黏著斑激酶改善心肌梗死后纖維化的研究及心臟組織透明化方法初探[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

10 熊麗霞;IL-13對成纖維細胞膠原蛋白合成的影響及其分子調(diào)控機制[D];南昌大學;2007年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 蘇紅蓮;機械敏感性電流及其對心肌—成纖維細胞偶聯(lián)作用的仿真研究[D];浙江大學;2015年

2 魯召輝;大鼠多器官成纖維細胞nanog蛋白的表達差異[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

3 何承文;豚鼠誘導性多能干細胞樣細胞的建立[D];寧夏大學;2015年

4 薛盛中;參芪促愈湯促進皮膚切口愈合的實驗研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(原名：甘肅中醫(yī)學院);2015年

5 郭婷婷;雌激素對雌性大鼠盆底肌間成纖維細胞機械應力效應的影響[D];山西醫(yī)科大學;2015年

6 包慈航;照射后成纖維細胞促進食管鱗癌EMT及HDGF表達的實驗研究[D];山東大學;2015年

7 袁政;腫瘤相關(guān)成纖維細胞對結(jié)直腸癌化療藥物敏感性試驗的影響[D];蘇州大學;2015年

8 龐若宇;晚期糖基化終末產(chǎn)物處理的成纖維細胞中TGF-β1通過Egr-1調(diào)控細胞外基質(zhì)生成[D];南方醫(yī)科大學;2015年

9 文歡;結(jié)直腸癌細胞與成纖維細胞相互作用過程中成纖維細胞生物學行為和Cx43表達研究[D];浙江大學;2015年

10 齊宏亮;正常奶牛和臨床型乳腺炎患牛乳腺間質(zhì)成纖維細胞生物學特性對比研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

，

本文編號：2458325