【摘要】：目的探討竇房結(jié)促生長轉(zhuǎn)錄因子TBX18對(duì)乳鼠心臟成纖維細(xì)胞的重編程作用。方法構(gòu)建攜帶人TBX18基因的重組腺病毒載體(Ad-TBX18)及只帶有綠色熒光蛋白的腺病毒載體(Ad-GFP),轉(zhuǎn)染乳鼠心臟成纖維細(xì)胞(CFs),分成實(shí)驗(yàn)組A(CFs-TBX18)、對(duì)照組B(CFs—GFP)和空白對(duì)照組C(CFs)。各組細(xì)胞培養(yǎng)8 d觀察形態(tài)學(xué)變化并檢測HCN4蛋白、Cox43蛋白及Cox45蛋白的表達(dá)情況;再檢測心肌肌鈣蛋白1(cTn1)蛋白的表達(dá)量并記錄細(xì)胞內(nèi)鈣火花的數(shù)量;最后檢測α-SMA蛋白的表達(dá)及Vimentin蛋白的熒光分布。結(jié)果成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ad—GFPTBX18后其形態(tài)學(xué)和搏動(dòng)功能均未向iSANs轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)染TBX18的成纖維細(xì)胞HCN4表達(dá)明顯增高,Cox43與Cox45蛋白表達(dá)下調(diào)。鈣火花檢測結(jié)果顯示,空白對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)有鈣火花,而實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中均未發(fā)現(xiàn)鈣火花。cTn1蛋白檢測結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)組中無cTn1蛋白表達(dá)。免疫熒光檢測顯示,各組中均有Vimentin蛋白的紅色熒光,實(shí)驗(yàn)組中α-SMA高表達(dá),而對(duì)照組α-SMA表達(dá)明顯降低。結(jié)論 CFs經(jīng)TBX18轉(zhuǎn)染后可重編程為高表達(dá)HCN4蛋白,和低表達(dá)COX43、45蛋白表達(dá)較低的肌成纖維細(xì)胞(MCFs)。
[Abstract]:Objective to investigate the reprogramming effect of sinoatrial node growth stimulating transcription factor (TBX18) on cardiac fibroblasts of neonatal rats. Methods Recombinant adenovirus vector (Ad-TBX18) carrying human TBX18 gene and adenovirus vector containing only green fluorescent protein (Ad-GFP) were constructed and transfected into neonatal rat cardiac fibroblasts (CFs),) and divided into experimental group A (CFs-TBX18). Control group B (CFs-GFP) and blank control group C (CFs). The morphological changes and the expression of HCN4 protein, Cox43 protein and Cox45 protein were observed in each group on the 8th day, then the expression of cardiac troponin 1 (cTn1) protein was detected and the number of calcium sparks in the cells was recorded. Finally, the expression of 偽-SMA protein and the fluorescence distribution of Vimentin protein were detected. Results the morphology and pulsatile function of fibroblasts transfected with Ad-GFPTBX18 were not transformed into iSANs. The expression of HCN4 was increased and the expression of Cox43 and Cox45 protein was down-regulated in fibroblasts transfected with TBX18. The results of calcium spark detection showed that there was no calcium spark in the blank control group, but no calcium spark was found in both the experimental group and the control group. The results of cTn1 protein detection showed that there was no expression of cTn1 protein in the experimental group. Immunofluorescence assay showed that there was red fluorescence of Vimentin protein in all groups. The expression of 偽-SMA in the experimental group was higher than that in the control group, but the expression of 偽-SMA in the control group was significantly decreased. Conclusion CFs can be reprogrammed into myoblasts with high expression of HCN4 protein and low expression of COX43,45 protein after transfection with TBX18, and the myoblasts with low expression of COX43,45 protein can be reprogrammed to express (MCFs).
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科/武漢大學(xué)心血管研究所/湖北省心血管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;十堰市太和醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：湖北省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2013BCB013) 國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81270249);國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81570306)
【分類號(hào)】：R329.2

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