【摘要】：目的：免疫實驗技術是從事免疫研究工作的基石,是實驗進度得以維持的保證。因此我把建立免疫實驗技術做為自己碩士研究生期間的重要工作。在三年的學習工作中,我主要建立了三套免疫實驗技術,它們分別為：小鼠γδT細胞的體外擴增技術；小鼠小腸上皮淋巴細胞(i-IELs)的分離技術以及免疫熒光技術在腫瘤微環(huán)境研究中的應用。 1.小鼠γδT細胞的體外擴增技術主要解決的是小鼠外周淋巴系統(tǒng)中γδT細胞稀少,無法獲得足夠的細胞用以完成小鼠淋巴細胞回輸重構實驗的問題。使用的方法是利用抗γδTCR和CD28的抗體包板,在IL-2的協(xié)同下對γδT細胞進行刺激,從而實現(xiàn)體外增殖。 2.小鼠小腸上皮淋巴細胞(i-IELs)的分離技術主要解決的是無法有效研究腸道上皮中γδT細胞的問題。方法依賴在缺氧環(huán)境下,小腸上皮容易脫離且EDTA具有螯合鈣、鎂離子的特性,通過物理方法完成小鼠小腸上皮淋巴細胞(i-IELs)的分離。分離得到的細胞可以按照實驗要求進行后續(xù)實驗。 3.免疫熒光技術主要解決的是研究Vγ1γδT細胞和Vγ4γδT細胞在皮下黑色素瘤中共定位的問題。問題的主要難點在于：皮下黑色素瘤的摘取,組織的預處理,冰凍切片的最適溫度以及熒光抗體的選擇。通過解決這一技術問題,不僅滿足了研究γδT細胞亞群在皮下黑色素瘤中定位的需要,還滿足了研究CD4陽性T細胞,CD8陽性T細胞以及樹突狀細胞在其他類型腫瘤中的浸潤情況的需求。
[Abstract]:Objective: immune experimental technology is the cornerstone of immune research and the guarantee to maintain the progress of the experiment. Therefore, I take the establishment of immunization experiment technology as my master's degree during the important work. During my three years of study, I have mainly set up three sets of immune test techniques, which are: amplification of mouse 緯 未 T cells in vitro; Isolation of mouse small intestinal epithelial lymphocytes (i-IELs) and application of immunofluorescence in the study of tumor microenvironment. 1. In vitro amplification of mouse 緯 未 T cells mainly solves the problem of the scarcity of 緯 未 T cells in the peripheral lymphoid system of mice and the inability to obtain enough cells to complete the retransmission and remodeling experiment of mouse lymphocytes. The anti-緯 未 TCR and CD28 antibodies were used to stimulate 緯 未 T cells in combination with IL-2, so that the proliferation of 緯 未 T cells could be realized in vitro. 2. The separation of mouse intestinal epithelial lymphocytes (i-IELs) mainly solves the problem that 緯 未 T cells in intestinal epithelium cannot be studied effectively. Methods the intestinal epithelial cells (i-IELs) of mice were isolated by physical method depending on the characteristics of EDTA chelating calcium and magnesium ions. The isolated cells can be followed up according to the experimental requirements. 3. Immunofluorescence technique mainly solves the problem of co-localization of V 緯 1 緯 未 T cells and V 緯 4 緯 未 T cells in subcutaneous melanoma. The main difficulties are: extraction of subcutaneous melanoma, pretreatment of tissue, optimum temperature of frozen section and selection of fluorescent antibody. By solving this technical problem, not only the need to study the localization of 緯 未 T cell subsets in subcutaneous melanoma, but also the study of CD4 positive T cells. Demand for infiltration of CD8-positive T cells and dendritic cells in other types of tumors.
【學位授予單位】：南開大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：2453263