發(fā)布時間：2019-04-01 11:41

【摘要】：1.產(chǎn)ESBL菌與非產(chǎn)ESBL菌中整合子的分布及其相互關(guān)系背景 近年來,人們發(fā)現(xiàn)整合子的水平傳播是導(dǎo)致耐藥性快速轉(zhuǎn)移的主要原因。整合子是通過位點特異性重組而將開放閱讀框集合在一起的一種基因元件,整合子能通過確�；虻臏蚀_表達而將這些開放閱讀框轉(zhuǎn)變成功能性的基因。ESBL基因常與其他耐藥基因共同存在于同一質(zhì)粒上,導(dǎo)致細菌較強的耐藥性,對臨床的抗感染治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)。當前,有關(guān)ESBL基因的研究已相當普遍,但是對產(chǎn)ESBL菌中整合子的分布情況的研究還相對較少。 目的 本實驗以中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院臨床分離的大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌為研究對象,對產(chǎn)ESBL菌與非產(chǎn)ESBL菌中的整合子進行研究。本研究的目的是研究整合子與ESBL基因的分布情況與細菌耐藥的關(guān)系,以及在產(chǎn)ESBL菌株與非產(chǎn)ESBL菌株中整合子的分布的不同導(dǎo)致的細菌耐藥性的差異,同時分析在含有整合子的細菌中ESBL基因?qū)毦退幮缘挠绊憽?方法 收集中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院2009年6月到2009年12月的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌共172株,采用PCR對Ⅰ類整合酶基因進行檢測,對整合子的可變區(qū)進行測序并用Alu Ⅰ酶進行限制性片段長度多態(tài)性分析。 結(jié)果 產(chǎn)ESBL菌株中Ⅰ類整合子陽性率為69%,非產(chǎn)ESBL菌株中Ⅰ類整合子陽性率為40.2%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。在產(chǎn)ESBL菌株中,整合子陽性菌株對12種抗菌藥的耐藥率高于整合子陰性菌株；在非產(chǎn)ESBL菌株中,整合子陽性菌株僅有8種抗菌藥的耐藥率高于整合子陰性菌株。在對整合子和ESBL基因之間的關(guān)系進行研究的另一實驗結(jié)果顯示：在整合子陽性菌株中,產(chǎn)ESBL菌株有9種抗菌藥的耐藥率高于非產(chǎn)ESBL菌株；在整合子陰性菌株中,產(chǎn)ESBL菌株有8種抗菌藥的耐藥率高于非產(chǎn)ESBL菌株。在整合子陽性菌株中,有84%的菌株可檢測到可變區(qū),仍有15.9%菌株則無法測得。在整合子的可變區(qū)中未發(fā)現(xiàn)ESBL基因,整合子與ESBL基因的共同存在情況仍有待于進一步研究探討。我們發(fā)現(xiàn)在整合子存在多種耐藥基因盒,而drfA17和aadA7同時存在的情況較多(41.4%)。有36.2%的菌株攜帶多個整合子。 結(jié)論 ESBL基因與Ⅰ類整合子在細菌中可以同時存在,并且它們的同時存在提高了細菌的多重耐藥水平。 2.在抗生素選擇性壓力下的整合酶表達. 背景 在選擇性壓力存在的情況下,細菌能夠通過遺傳變異誘發(fā)一系列的反應(yīng)來獲得選擇優(yōu)勢。這些反應(yīng)包括SOS反應(yīng)、一般的壓力反應(yīng)、熱休克反應(yīng)和嚴緊反應(yīng),這些反應(yīng)都能夠影響易錯聚合酶的調(diào)節(jié)功能。在不同的選擇性壓力下,細菌對抗生素的耐藥基因一旦產(chǎn)生,就可以通過整合子的位點特異性重組機制在不同的菌株之間進行傳播,從而導(dǎo)致新的耐藥菌株的產(chǎn)生。亞抑菌濃度的抗生素可以誘發(fā)細菌的耐藥性,另外也可以通過類似SOS反應(yīng)和一般壓力反應(yīng)的遺傳保護機制來誘導(dǎo)。當誘導(dǎo)因素存在時,細菌能夠通過改變自身基因的表達來適應(yīng)這些壓力。 目的 整合酶基因在細菌耐藥性基因水平轉(zhuǎn)移的過程中具有重要作用,本研究旨在分析在亞抑菌濃度的作用下,不同抗生素對整合子中整合酶表達的的影響。 方法 在已收集并對可變區(qū)進行測序的Ⅰ類整合子陽性的細菌中,選出兩株大腸埃希菌(E9和E22)作為研究對象。我們選擇三種抗生素作為誘導(dǎo)藥物,三種抗生素分別為甲氧芐啶(一種化療藥物)、鏈霉素(氨基糖苷類)及左氧氟沙星(人工合成的氟喹諾酮類)。分別測得三種抗生素對兩株大腸埃希菌的MIC。用含有低于MIC的抗生素濃度的LB培養(yǎng)基連續(xù)地培養(yǎng)細菌4個月,同時用不含抗生素的LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的細菌作為陰性對照。為了給細菌提供充足的營養(yǎng),每48小時更換一次培養(yǎng)基。在細菌生長的過程中,每一個月留一次細菌進行鑒定。最后對不同4批細菌的整合酶表達進行定量測定。測定時以細菌的16S rDNA為內(nèi)參,采用ΔΔCt法計算出整合酶的相對表達量。 結(jié)果 對于兩株實驗菌株,左氧氟沙星組整合酶表達升高最多。通過4個月的培養(yǎng),E9的整合酶的表達量升高了77.7倍,E22的表達量則升高了18.25倍。結(jié)果說明,在左氧氟沙星的選擇性壓力下,細菌整合子中整合酶的表達水平明顯提高。而在甲氧芐啶組,兩株細菌的整合酶表達水平均無明顯改變。在鏈霉素組,兩株細菌的整合酶表達水平有一定升高,但升高程度低于左氧氟沙星組,其中E9整合酶的表達量升高了13.73倍,E22整合酶的表達量升高了3.7倍。 而在兩株細菌的陰性對照組中,整合酶的表達量變化缺少規(guī)律性,但改變量均較小。其中,E9整合酶的表達量升高了4.2倍,E22整合酶的表達量升高了1.9倍。 結(jié)論 在長期的選擇性壓力作用下,整合子中整合酶能被不同程度的誘導(dǎo),而誘導(dǎo)的程度則與抗生素的種類和菌株本身有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R378

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本文編號：2451527