發(fā)布時間：2019-03-29 06:27

【摘要】：背景與目的： 肝臟移植是治療終末期肝臟疾病有效的治療方法,術(shù)中阻斷下腔靜脈,門靜脈及肝動脈的血流,造成全肝缺血再灌注損傷產(chǎn)生大量有害介質(zhì)隨血流到達遠隔臟器,勢必對遠隔臟器造成不同程度的損傷,同時門脈血流阻斷后可使門脈壓力增加,引起胃腸道毛細血管高壓性受損,微循環(huán)障礙,消化道粘膜水腫、出血、潰瘍和壞死,形成內(nèi)毒素血癥及消化道細菌移位,給移植成功帶來了巨大的困難,嚴重威脅著術(shù)后病人的存活率。全肝缺血再灌注引起消化系重要臟器-胃的損傷的病理生理機制,至今尚未完全闡明。 本實驗通過手術(shù)的方法建立大鼠的全肝缺血再灌注損傷模型,觀察胃組織功能及結(jié)構(gòu)改變,動態(tài)檢測血漿及胃組織內(nèi)炎性反應、脂質(zhì)過氧化反應,并通過鈣調(diào)、內(nèi)源性H2S/CSE兩條信號轉(zhuǎn)導通路及線粒體能量代謝,較全面地研究全肝缺血再灌注損傷后胃損傷的發(fā)病機制。并應用H2S供體NaHS、CaN抑制劑FK506、醛固酮拮抗劑螺內(nèi)酯及激素甲基強的松龍進行干預,進一步研究在全肝缺血再灌注胃組織損傷中的信號傳導機制及各信號通路之間的相互作用,以尋找對胃損傷有效的保護措施。 本研究分為兩部分：一、全肝缺血再灌注致大鼠胃損傷的機理及干預效果；二、全肝缺血再灌注致大鼠胃損傷的線粒體機制及干預效果。 方法：通過手術(shù)方法建立大鼠的全肝缺血再灌注模型。 第一部分實驗分組：雄性Wistar大鼠184只,隨機分為23組,每組8只：正常對照組、缺血20min再灌注0h、2h、6h、12h、24h、48h、72h組、缺血40min再灌注0h、6h、72h組；FK-506、MP、NaHS、Spiron空白對照組及20min+6h干預組；MP、Spiron 40min+6h及40min+72h干預組。 第二部分實驗分組：雄性Wistar大鼠80只,隨機分為10組,每組8只：正常對照組、缺血20min再灌注6h組、FK-506、MP、NaHS、Spiron空白對照組及20min+6h干預組。 再灌注后觀察各組大鼠胃排空率、小腸推進率、胃組織病理、硫化氫(H2S)、丙二醛(MDA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的變化,同時檢測各組大鼠胃組織CSE活性、核因子(NF-κB)、細胞間粘附分子(ICAM-1),鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)的含量和活性以及用RT-PCR的方法檢測胃CaN mRNA (?)勺表達。測定線粒體呼吸功能、膜電位及線粒體酶的變化,觀察光鏡下胃組織細胞超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：第一部分結(jié)果：全肝缺血再灌注初期2h-6h胃功能(排空率、小腸推動力)就表現(xiàn)出最嚴重損傷,光鏡下觀察胃組織結(jié)果同樣提示再灌注后6h胃粘膜損傷最重。與正常對照組比較,缺血20min再灌注組,血清TNF-α、血漿MDA、血漿AngⅡ水平、胃ICAM-1、NF-κB和胃ALD水平在缺血及再灌注后開始升高,再灌注2h-6h達到峰值。血漿ALD在全肝缺血20min增高并達到高峰,再灌注后開始降低。胃CaN含量和胃CaN mRNA在缺血期先升高,后開始下降,再灌注12h時達最低,72h時恢復,胃CaN活性在缺血期、再灌注初期變化不明顯,再灌注6h開始升高,12h達峰值。血漿H2S于缺血20min開始明顯下降,再灌注后2h開始升高,6h達最高峰,至再灌注后72h逐漸恢復,而胃CSE酶活性在缺血期及再灌注初期變化不明顯,于創(chuàng)傷后6h降低到最低,72h后才逐漸恢復。缺血40min再灌注組,表現(xiàn)出相同的變化趨勢,大多數(shù)指標變化程度較缺血20min相應組更為顯著,胃組織損傷較缺血20min組更為嚴重。應用FK506、Spiron、MP和NaHS藥物干預后,觀察到創(chuàng)傷最重時間點的胃組織各項指標出現(xiàn)不同程度改善,提示藥物對胃組織損傷起到了不同程度的保護作用。 第二部分結(jié)果：與正常對照組比,缺血20min再灌注6h組線粒體呼吸功能下降,RCR及P/0明顯降低,Na+/K+ATP酶,SDH酶及膜電位下降,Ca2+-ATP酶含量升高。應用FK506、Spiron、MP和NaHS藥物干預后,與缺血20min再灌注6h組比較,各項指標均有不同程度的改善。 結(jié)論：全肝缺血再灌注過程中,缺血階段和再灌注階段均可造成胃損傷,且隨缺血時間延長,胃損傷加重,以再灌注6h損傷最為嚴重。炎細胞及炎性細胞因子的活化、過度的氧化應激、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶、內(nèi)源性H2S/CSE兩條信號轉(zhuǎn)導通路和線粒體能量代謝障礙均參與了全肝缺血再灌注后胃損傷。應用FK506、Spiron、MP和NaHS藥物干預后,藥物通過外源性H2S補充及CaN抑制劑降低了炎細胞浸潤及炎性細胞因子激活、直接清除氧自由基、增加線粒體呼吸功能、提高膜電位及線粒體ATP酶產(chǎn)量,對胃損傷起到不同程度的保護作用。
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【學位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R657.3;R363

【參考文獻】

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本文編號：2449247