【摘要】:背景與目的: 肝臟移植是治療終末期肝臟疾病有效的治療方法,術(shù)中阻斷下腔靜脈,門靜脈及肝動(dòng)脈的血流,造成全肝缺血再灌注損傷產(chǎn)生大量有害介質(zhì)隨血流到達(dá)遠(yuǎn)隔臟器,勢(shì)必對(duì)遠(yuǎn)隔臟器造成不同程度的損傷,同時(shí)門脈血流阻斷后可使門脈壓力增加,引起胃腸道毛細(xì)血管高壓性受損,微循環(huán)障礙,消化道粘膜水腫、出血、潰瘍和壞死,形成內(nèi)毒素血癥及消化道細(xì)菌移位,給移植成功帶來了巨大的困難,嚴(yán)重威脅著術(shù)后病人的存活率。全肝缺血再灌注引起消化系重要臟器-胃的損傷的病理生理機(jī)制,至今尚未完全闡明。 本實(shí)驗(yàn)通過手術(shù)的方法建立大鼠的全肝缺血再灌注損傷模型,觀察胃組織功能及結(jié)構(gòu)改變,動(dòng)態(tài)檢測(cè)血漿及胃組織內(nèi)炎性反應(yīng)、脂質(zhì)過氧化反應(yīng),并通過鈣調(diào)、內(nèi)源性H2S/CSE兩條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及線粒體能量代謝,較全面地研究全肝缺血再灌注損傷后胃損傷的發(fā)病機(jī)制。并應(yīng)用H2S供體NaHS、CaN抑制劑FK506、醛固酮拮抗劑螺內(nèi)酯及激素甲基強(qiáng)的松龍進(jìn)行干預(yù),進(jìn)一步研究在全肝缺血再灌注胃組織損傷中的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制及各信號(hào)通路之間的相互作用,以尋找對(duì)胃損傷有效的保護(hù)措施。 本研究分為兩部分:一、全肝缺血再灌注致大鼠胃損傷的機(jī)理及干預(yù)效果;二、全肝缺血再灌注致大鼠胃損傷的線粒體機(jī)制及干預(yù)效果。 方法:通過手術(shù)方法建立大鼠的全肝缺血再灌注模型。 第一部分實(shí)驗(yàn)分組:雄性Wistar大鼠184只,隨機(jī)分為23組,每組8只:正常對(duì)照組、缺血20min再灌注0h、2h、6h、12h、24h、48h、72h組、缺血40min再灌注0h、6h、72h組;FK-506、MP、NaHS、Spiron空白對(duì)照組及20min+6h干預(yù)組;MP、Spiron 40min+6h及40min+72h干預(yù)組。 第二部分實(shí)驗(yàn)分組:雄性Wistar大鼠80只,隨機(jī)分為10組,每組8只:正常對(duì)照組、缺血20min再灌注6h組、FK-506、MP、NaHS、Spiron空白對(duì)照組及20min+6h干預(yù)組。 再灌注后觀察各組大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率、胃組織病理、硫化氫(H2S)、丙二醛(MDA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的變化,同時(shí)檢測(cè)各組大鼠胃組織CSE活性、核因子(NF-κB)、細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1),鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)的含量和活性以及用RT-PCR的方法檢測(cè)胃CaN mRNA (?)勺表達(dá)。測(cè)定線粒體呼吸功能、膜電位及線粒體酶的變化,觀察光鏡下胃組織細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果:第一部分結(jié)果:全肝缺血再灌注初期2h-6h胃功能(排空率、小腸推動(dòng)力)就表現(xiàn)出最嚴(yán)重?fù)p傷,光鏡下觀察胃組織結(jié)果同樣提示再灌注后6h胃粘膜損傷最重。與正常對(duì)照組比較,缺血20min再灌注組,血清TNF-α、血漿MDA、血漿AngⅡ水平、胃ICAM-1、NF-κB和胃ALD水平在缺血及再灌注后開始升高,再灌注2h-6h達(dá)到峰值。血漿ALD在全肝缺血20min增高并達(dá)到高峰,再灌注后開始降低。胃CaN含量和胃CaN mRNA在缺血期先升高,后開始下降,再灌注12h時(shí)達(dá)最低,72h時(shí)恢復(fù),胃CaN活性在缺血期、再灌注初期變化不明顯,再灌注6h開始升高,12h達(dá)峰值。血漿H2S于缺血20min開始明顯下降,再灌注后2h開始升高,6h達(dá)最高峰,至再灌注后72h逐漸恢復(fù),而胃CSE酶活性在缺血期及再灌注初期變化不明顯,于創(chuàng)傷后6h降低到最低,72h后才逐漸恢復(fù)。缺血40min再灌注組,表現(xiàn)出相同的變化趨勢(shì),大多數(shù)指標(biāo)變化程度較缺血20min相應(yīng)組更為顯著,胃組織損傷較缺血20min組更為嚴(yán)重。應(yīng)用FK506、Spiron、MP和NaHS藥物干預(yù)后,觀察到創(chuàng)傷最重時(shí)間點(diǎn)的胃組織各項(xiàng)指標(biāo)出現(xiàn)不同程度改善,提示藥物對(duì)胃組織損傷起到了不同程度的保護(hù)作用。 第二部分結(jié)果:與正常對(duì)照組比,缺血20min再灌注6h組線粒體呼吸功能下降,RCR及P/0明顯降低,Na+/K+ATP酶,SDH酶及膜電位下降,Ca2+-ATP酶含量升高。應(yīng)用FK506、Spiron、MP和NaHS藥物干預(yù)后,與缺血20min再灌注6h組比較,各項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的改善。 結(jié)論:全肝缺血再灌注過程中,缺血階段和再灌注階段均可造成胃損傷,且隨缺血時(shí)間延長,胃損傷加重,以再灌注6h損傷最為嚴(yán)重。炎細(xì)胞及炎性細(xì)胞因子的活化、過度的氧化應(yīng)激、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶、內(nèi)源性H2S/CSE兩條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和線粒體能量代謝障礙均參與了全肝缺血再灌注后胃損傷。應(yīng)用FK506、Spiron、MP和NaHS藥物干預(yù)后,藥物通過外源性H2S補(bǔ)充及CaN抑制劑降低了炎細(xì)胞浸潤及炎性細(xì)胞因子激活、直接清除氧自由基、增加線粒體呼吸功能、提高膜電位及線粒體ATP酶產(chǎn)量,對(duì)胃損傷起到不同程度的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2011
【分類號(hào)】:R657.3;R363
【參考文獻(xiàn)】
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