發(fā)布時(shí)間：2019-03-13 11:46

【摘要】：目的:觀察過(guò)表達(dá)死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白(Daxx)對(duì)K562細(xì)胞活力和向巨核細(xì)胞分化的影響。方法:建立穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Daxx的K562細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)Daxx的過(guò)表達(dá)效果,CCK-8法檢測(cè)過(guò)表達(dá)后細(xì)胞活力的變化;佛波酯(PMA)誘導(dǎo)K562細(xì)胞向巨核細(xì)胞系分化,Western blot檢測(cè)在K562細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化過(guò)程中Daxx和p-ERK的表達(dá)變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD41和CD61的表達(dá)變化;PMA處理過(guò)表達(dá)Daxx的K562細(xì)胞,NBT還原實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞分化情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)Daxx后CD41和CD61的表達(dá)變化,Western blot檢測(cè)p-ERK的蛋白水平。結(jié)果:建立了穩(wěn)定的過(guò)表達(dá)Daxx的K562細(xì)胞,過(guò)表達(dá)Daxx抑制K562細(xì)胞的活力。PMA誘導(dǎo)K562細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化,CD41和CD61表達(dá)水平增高,同時(shí)p-ERK的蛋白水平升高,Daxx表達(dá)水平下降。過(guò)表達(dá)Daxx可以抑制K562細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化,CD41和CD61表達(dá)降低,同時(shí)p-ERK的蛋白水平降低。結(jié)論:過(guò)表達(dá)Daxx可以抑制K562細(xì)胞生長(zhǎng)及向巨核細(xì)胞分化,同時(shí)抑制ERK的磷酸化。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of overexpression of death domain associated protein (Daxx) on K562 cell viability and differentiation into megakaryocyte. Methods: K562 cells with stable over-expression of Daxx were established. The over-expression of Daxx was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot, and the changes of cell viability after over-expression were detected by CCK-8 method. The differentiation of K562 cells into megakaryocytes was induced by phorbol ester (PMA)., Western blot was used to detect the expression of Daxx and p-ERK during the differentiation of K562 cells into megakaryocytes, and the expression of CD41 and CD61 was detected by flow cytometry. K562 cells overexpressing Daxx were treated with PMA. The differentiation of K562 cells was detected by NBT reduction assay. The expression of CD41 and CD61 after Daxx was detected by flow cytometry. The expression of CD41 and CD61 was detected by, Western blot to detect the protein level of p-ERK. Results: a stable Daxx-overexpressed K562 cell line was established. Overexpression of Daxx inhibited K562 cell viability. PMA induced the differentiation of K562 cells into megakaryocytes, increased the expression of CD41 and CD61, increased the protein level of p-ERK and decreased the expression level of Daxx. Overexpression of Daxx inhibited the differentiation of K562 cells into megakaryocytes, decreased the expression of CD41 and CD61, and decreased the protein level of p-ERK. Conclusion: overexpression of Daxx can inhibit the growth and differentiation of K562 cells to megakaryocytes, and inhibit the phosphorylation of ERK.
【作者單位】： 嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院;
【基金】：“十二五”浙江省高校藥理學(xué)重點(diǎn)學(xué)科資助項(xiàng)目 嘉興市科技局項(xiàng)目(No.2015AY23063) 嘉興學(xué)院重點(diǎn)SRT項(xiàng)目(No.851715065)
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2439362