【摘要】：目的:血管緊張素-Ⅱ(angiotensin-Ⅱ, Ang-Ⅱ)是一種血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)收縮興奮劑。SM22α是一種actin結(jié)合蛋白,僅表達(dá)于收縮型的VSMCs中。SM22α是否參與Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮,尚不清楚。體外培養(yǎng)的VSMCs已發(fā)生表型轉(zhuǎn)化,由收縮型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣尚?失去收縮能力。本研究用全反式維甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)誘導(dǎo)培養(yǎng)的VSMCs再分化,采用RNA干擾技術(shù),敲低內(nèi)源性SM22α表達(dá),觀察SM22α在Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮中的作用,并探討其作用機(jī)制。 方法與結(jié)果: 1 ATRA誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的VSMCs再分化 SM22α和SM-α-actin的表達(dá)是分化型VSMCs的重要分子標(biāo)志。ATRA誘導(dǎo)40 h后,與正常培養(yǎng)(10% FBS)的VSMCs相比,SM-α-actin和SM22α的表達(dá)明顯上調(diào),說明ATRA可誘導(dǎo)VSMCs再分化。 2再分化的VSMCs對Ang-Ⅱ刺激產(chǎn)生收縮應(yīng)答 用Ang-Ⅱ(0.1μM)刺激常規(guī)培養(yǎng)和ATRA處理40 h的VSMCs,細(xì)胞的收縮能力明顯不同。再分化的VSMCs的收縮指數(shù)(0.28±0.019)顯著高于對照組(0.06±0.01)(P0.05)。 3 SM22α參與Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮 使用RNA干擾技術(shù)敲低內(nèi)源性SM22α的表達(dá)后,觀察對Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮的影響。結(jié)果顯示,敲低組的細(xì)胞收縮指數(shù)(0.11±0.015)低于對照組(0.29±0.021),兩組之間有顯著差異(P0.05)。提示Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮依賴于SM22α。 4 Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮依賴于ERK通路的活化 Ang-Ⅱ刺激導(dǎo)致ERK的磷酸化活化。用PD98059(10μM)(ERK上游激酶MEK抑制劑)抑制ERK的激活,Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的細(xì)胞收縮減弱,收縮指數(shù)(0.13±0.012)顯著低于對照組(0.26±0.023)(P0.05)。上述結(jié)果提示,ERK信號通路介導(dǎo)Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮。 5 SM22α參與Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的ERK活化 用siRNA敲低內(nèi)源性SM22α表達(dá),觀察對Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的ERK活化的影響。Western blot分析表明,Ang-Ⅱ刺激后,對照組及SM22α敲低組的ERK磷酸化水平均有升高,但SM22α敲低組的上升幅度顯著低于對照組。 6 SM22α參與actin應(yīng)力纖維的形成 細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示,ATRA處理的細(xì)胞,其SM22α表達(dá)量豐富,應(yīng)力纖維呈束狀,排列規(guī)則,SM22α與應(yīng)力纖維共定位。而SM22α敲低組的應(yīng)力纖維稀疏,在胞漿散在分布。以上結(jié)果說明,SM22α在應(yīng)力纖維形成過程中起重要作用。 結(jié)論: 1 ATRA誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的VSMCs再分化,并重新獲得收縮能力。 2 SM22α參與Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮。 3 SM22α通過促進(jìn)actin應(yīng)力纖維的形成,調(diào)節(jié)ERK的活化,從而影響Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC收縮。
[Abstract]:Objective: angiotensin- 鈪，

本文編號：2426717