【摘要】：埃博霉素（Epothilones）是粘細(xì)菌（Myxobacteria）纖維堆囊菌（Sorangiumcellulosum）產(chǎn)生的十六元的大環(huán)內(nèi)酯類次級代謝產(chǎn)物。埃博霉素與目前臨床常用的抗腫瘤化療藥物紫杉醇具有相似的穩(wěn)定微管的作用機理，并且埃博霉素的抗腫瘤譜更廣，不受P-糖蛋白作用，對多藥耐藥（包括對紫杉醇耐藥）的細(xì)胞系均有抑制作用。埃博霉素內(nèi)酰胺衍生物Ixabepilone已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)用于治療乳腺癌和卵巢癌等。 本文對埃博霉素的提取，分離進(jìn)行優(yōu)化。粘細(xì)菌發(fā)酵液用大孔樹脂吸附后，將樹脂填柱，用不同濃度的乙醇溶液解吸附，所得的吸附液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至小體積，得到粗提取，粗提物用甲醇復(fù)溶后，經(jīng)高效液相檢測分析，對梯度洗脫液進(jìn)行優(yōu)化。最后確定用50%以上的乙醇溶液梯度洗脫，減少了洗脫時間和溶液的用量。經(jīng)乙醇洗脫后的溶液采用葡聚糖凝膠LH-20進(jìn)行分離，在經(jīng)過高效液相色譜的制備得到目標(biāo)產(chǎn)物埃博霉素B，所得的純品與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行薄層層析比對，參照核磁共振波譜確證其結(jié)構(gòu)，與文獻(xiàn)報道一致。 采用UPLC-Q-TOF/MS對埃博霉素B（Epothilone B）純化產(chǎn)品及粘細(xì)菌發(fā)酵液提取物進(jìn)行分析。運用ACQUITY HSS T3超高效液相色譜柱（2.1×50mm，1.8μm），，以甲醇-0.1%甲酸水溶液為流動相梯度洗脫；質(zhì)譜使用ESI離子源，負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)。結(jié)果運用UPLC-Q-TOF/MS方法可以檢測到埃博霉素B純化產(chǎn)品中的微量雜質(zhì)以及發(fā)酵液提取物中主要產(chǎn)物。UPLC-Q-TOF/MS方法操作簡單，快捷，可作為埃博霉素B的有效檢測方法。 由于埃博霉素是抗腫瘤化療藥物，具有一定的細(xì)胞毒性，能夠引起胃腸道反應(yīng)以及骨髓抑制等毒副作用，因此對埃博霉素進(jìn)行修飾以降低其毒副作用，抗腫瘤小分子藥物可采用高分子聚合材料修飾來降低其毒副作用。本文以埃博霉素B為起始原料，選用分子量為5000和20000的聚乙二醇（PEG）和埃博霉素進(jìn)行偶聯(lián)。選擇的聚乙二醇為一端甲氧基化，另一端為羧基化的聚乙二醇（M-PEG-COOH），通過DCC縮合及DMAP催化，選擇性酯化7-OH。將聚乙二醇與埃博霉素B相連接，產(chǎn)物經(jīng)TLC，1H-NMR確認(rèn)結(jié)構(gòu)，使用MALDI/TOF-MS測定產(chǎn)物的分子量，確證1分子Epothilone B與1分子PEG相連接。 對PEG偶聯(lián)得到的化合物進(jìn)行初步的體外細(xì)胞實驗檢測活性：使用人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，用半數(shù)有效抑制濃度（IC50）表示抗癌效應(yīng)。具體結(jié)果為：MPEG5000-Epo B的IC50為0.57μM，MPEG20000-Epo B IC50為8.4×10-3μM。結(jié)果表明，PEG偶聯(lián)物對MCF-7人體乳腺癌細(xì)胞增殖均有抑制作用，PEG分子量20000偶聯(lián)物的MCF-7的抑制作用較強。 本文對埃博霉素B的提取制備進(jìn)行優(yōu)化，選擇乙醇做洗脫劑為工業(yè)化奠定基礎(chǔ)，對埃博霉素B純化產(chǎn)品及粘細(xì)菌發(fā)酵液提取物進(jìn)行UPLC-Q-TOF/MS分析，對于控制產(chǎn)品的質(zhì)量以及改進(jìn)工藝，提高代謝物產(chǎn)量具有重要的指導(dǎo)意義，也可用于篩選高產(chǎn)菌株。使用聚乙二醇對埃博霉素B進(jìn)行修飾得到的產(chǎn)物均具有活性，為進(jìn)一步的埃博霉素B衍生化做了初步探索。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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1 郭仕華;婁紅祥;賀艷麗;;天然抗腫瘤藥物的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)藥(植物藥分冊);2005年05期

2 萬有才;劉英;劉明;宋瑞;汪選斌;;漢防己甲素抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J];時珍國醫(yī)國藥;2010年01期

3 帥利華;新抗癌藥Ceprate進(jìn)入Ⅱ期臨床[J];藥學(xué)進(jìn)展;1995年02期

4 林慧,陳澤林;抗惡性腫瘤藥物的研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;1998年08期

本文編號：2426079