【摘要】：目的：通過采用脂多糖作用體外培養(yǎng)人蛻膜細(xì)胞,研究脂多糖對人蛻膜細(xì)胞中孕激素受體(PR)和TNF-a的表達(dá)改變,探討細(xì)菌感染導(dǎo)致自然流產(chǎn)的發(fā)病機理。 方法：收集正常早孕人工流產(chǎn)病例10例,分離人原代蛻膜細(xì)胞,用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測胎盤泌乳素鑒定蛻膜基質(zhì)細(xì)胞。取培養(yǎng)傳代第4、5代細(xì)胞加入脂多糖(其終濃度分別為25ng/ml 50ng/ml 100ng/ml 200ng/ml)處理24h為實驗組一至四組,僅加入細(xì)胞培養(yǎng)液為對照組。采用激光共聚焦-細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測各組蛻膜細(xì)胞中PR及TNF-α的Cy3熒光表達(dá),用Image J圖像分析軟件分析PR及TNF-α的熒光強度,采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,用隨機區(qū)組設(shè)計方差分析比較不同濃度LPS對蛻膜細(xì)胞中PR及TNF-α表達(dá)的變化。并用線性相關(guān)分析法對各組蛻膜細(xì)胞的PR及TNF-α的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果：1.人原代蛻膜細(xì)胞體外培養(yǎng)分離成功,經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測蛻膜細(xì)胞胎盤泌乳素陽性率95%。2.實驗組蛻膜細(xì)胞中PR平均熒光強度較對照組明顯降低,且隨著脂多糖濃度逐漸增加,PR的平均熒光強度降逐漸降低,差異顯著性,P0.01,有統(tǒng)計學(xué)意義。3.實驗組蛻膜細(xì)胞中TNF-α平均熒光強度較對照組明顯增強,且隨著脂多糖濃度增大,蛻膜細(xì)胞內(nèi)TNF-α熒光強度逐漸增強,差異有顯著性,P0.01,有統(tǒng)計學(xué)意義。4.蛻膜細(xì)胞中,PR與TNF-α表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.841,P0.01) 結(jié)論：1.脂多糖使體外培養(yǎng)的人蛻膜細(xì)胞中PR表達(dá)減少,脂多糖濃度越高,PR越低。2.脂多糖促進(jìn)人蛻膜細(xì)胞的TNF-α的表達(dá)增加,脂多糖濃度越高,TNF-a表達(dá)越高。3.體外培養(yǎng)人蛻膜細(xì)胞中PR與TNF-α表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of progesterone receptor (PR) and progesterone receptor (TNF-a) in decidua cells cultured in vitro by lipopolysaccharide (LPS), and to explore the pathogenesis of spontaneous abortion induced by bacterial infection. Methods: human decidual cells were isolated from 10 cases of normal early pregnancy induced abortion, and placental prolactin was detected by immunocytochemistry to identify decidua stromal cells. The cells in the 4th passage were treated with lipopolysaccharide (25ng/ml 50ng/ml 100ng/ml 200ng/ml) for 24 hours as the experimental group, and only the cell culture medium was added as the control group. The Cy3 fluorescence expression of PR and TNF- 偽 in decidual cells was detected by laser confocal cell immunofluorescence technique. The fluorescence intensity of PR and TNF- 偽 was analyzed by Image J image analysis software, and the data was analyzed by SPSS17.0 software package. The changes of PR and TNF- 偽 expression in decidual cells with different concentrations of LPS were compared by random block design analysis of variance. The expression of PR and TNF- 偽 in decidual cells were analyzed by linear correlation analysis. Results: 1. Human primary decidual cells were isolated successfully in vitro. The positive rate of prolactin in placenta of decidual cells was detected by immunocytochemistry. The average fluorescence intensity of PR in decidual cells in the experimental group was significantly lower than that in the control group, and with the increase of lipopolysaccharide concentration, the average fluorescence intensity of PR decreased gradually, the difference was significant (P 0.01, P < 0.05). The average fluorescence intensity of TNF- 偽 in decidual cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group, and with the increase of lipopolysaccharide concentration, the fluorescence intensity of TNF- 偽 in decidua cells gradually increased, the difference was significant (P 0.01, P < 0.05). There was a negative correlation between PR and TNF- 偽 expression in decidual cells (r-0.841, P0.01). Conclusion: 1. Lipopolysaccharide reduced the expression of PR in cultured human decidua cells. The higher the concentration of lipopolysaccharide, the lower PR was. Lipopolysaccharide promoted the expression of TNF- 偽 in decidual cells. The higher the concentration of lipopolysaccharide, the higher the expression of TNF-a. There was a negative correlation between PR and TNF- 偽 expression in human decidual cells cultured in vitro.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：2425062