【摘要】：目的:本實驗探討人羊膜上皮細胞(human amniotic epithelial cells,h AECs)預防RAW264.7細胞在脂多糖(LPS)刺激后向M1極化的作用以及可能機制。方法:采用流式細胞儀檢測細胞凋亡,劃痕實驗檢測細胞遷移,ELISA檢測細胞釋放NO濃度,Real-time PCR檢測白細胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、精氨酸酶1(arginase-1,Agr-1)及甘露糖受體(mannose receptor,MR又稱CD206)等基因表達情況,Western blotting檢測RAW264.7胞質(zhì)蛋白p-IκBα以及胞核蛋白NF-κB的表達。結(jié)果:RAW264.7培養(yǎng)基組與h AECs條件培養(yǎng)基干預組的凋亡率分別為5.68%±2.3%、6.68%±2.1%(p0.05)。LPS刺激組與h AECs條件培養(yǎng)基干預組兩組的遷移率分別為42.03±0.07%、14.71±0.04%(p0.05);LPS刺激組與h AECs干預組兩組NO釋放量分別為27.73±10μM、13.33±6.43μM(p0.05);Real Time-PCR結(jié)果顯示,h AECs干預組M1型巨噬細胞相關(guān)基因如IL-1β、TNF-α、iNOS以及INF-β的表達顯著下調(diào),M2型巨噬細胞相關(guān)基因如Arg-1、CD206、CD36等表達上調(diào)(p0.01)。Western blotting結(jié)果顯示,hAECs干預組RAW264.7中胞質(zhì)蛋白p-IκBа以及胞核蛋白NF-κB的蛋白含量降低。結(jié)論:h AECs與RAW264.7預培養(yǎng)能有效預防LPS刺激下RAW264.7向M1極化,其機制可能是通過抑制IκBα蛋白磷酸化來降低核內(nèi)NF-κB的含量,從而抑制了M1型相關(guān)基因的表達。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of human amniotic epithelial cell (human amniotic epithelial cells,h AECs) on preventing RAW264.7 cells from polarization to M1 induced by lipopolysaccharide (LPS) and its possible mechanism. Methods: apoptosis was detected by flow cytometry, cell migration was detected by scratch test, NO concentration was detected by ELISA, interleukin-1 尾 (IL-1 尾) was detected by Real-time PCR, tumor necrosis factor- 偽 (tumor necrosis factor- 偽 was detected. TNF- 偽, (inducible nitric oxide synthase,i NOS), argininase 1 (arginase-1,Agr-1) and mannose receptor,MR receptor (CD206), etc. The expression of RAW264.7 cytoplasmic protein p-I 魏 B 偽 and nuclear protein NF- 魏 B was detected by Western blotting. Results: the apoptotic rates of RAW264.7 medium group and h AECs conditioned medium group were 5.68% 鹵2.3, respectively. The migration rates of the two groups were 42.03 鹵0.07 鹵14.71 鹵0.04% (p0.05) and 14.71 鹵0.04% (p0.05), respectively. The release of NO in LPS stimulation group and h AECs intervention group was 27.73 鹵10 渭 M, 13.33 鹵6.43 渭 M (p0.05), respectively. Real Time-PCR results showed that the expression of M1 type macrophage associated genes such as IL-1 尾, TNF- 偽, iNOS and INF- 尾 were significantly down-regulated in, h AECs intervention group, while M 2 macrophage associated genes such as Arg-1,CD206, were significantly down-regulated. The expression of CD36 was up-regulated (p0.01). Western blotting results showed that the contents of p-I 魏 B protein and NF- 魏 B protein in RAW264.7 were decreased in hAECs intervention group. Conclusion: h AECs and RAW264.7 preculture can effectively prevent RAW264.7 polarization to M1 induced by LPS. The mechanism may be that the expression of M1 related genes can be inhibited by inhibiting the phosphorylation of I 魏 B 偽 protein and decreasing the content of NF- 魏 B in nucleus.
【作者單位】： 中南大學基礎醫(yī)學院生殖與干細胞研究所;荊州市第一人民醫(yī)院檢驗科;人類干細胞國家工程研究中心;
【基金】：中南大學碩士生自主探索創(chuàng)新項目(2014zzts289);中南大學教師研究基金項目(905010092) 長沙科技計劃項目(K1203005-31)
【分類號】：R392

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本文編號：2411511