發(fā)布時間：2019-01-18 17:52

【摘要】：目的:研究N-糖基化移位對乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗體外蛋白表達(dá)及小鼠體內(nèi)體液免疫及細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響。方法:通過基因工程中定點突變技術(shù),將乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)中第4位氨基酸上連接的糖鏈去除,或?qū)⑻擎溡来我莆恢恋?、6或7位氨基酸,來構(gòu)建N-糖基化去除及移位的核酸疫苗,分別命名為Adr-dN4、Adr-N4-5、Adr-N4-6、Adr-N4-7。用上述核酸疫苗與野生型MHBs核酸疫苗(pSW3891/MHBs/Adr,簡稱Adr)及空載體質(zhì)粒pSW3891分別用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,應(yīng)用蛋白印跡法檢測MHBs的表達(dá)。采用肌肉注射法,以各組疫苗分別對BALB/c小鼠于第0、2、4和6周進(jìn)行免疫,用ELISA法檢測小鼠血清中抗-HBs抗體、ELISPOT法檢測小鼠表面抗原多肽特異性分泌IFN-γ的脾細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果:蛋白印跡法結(jié)果顯示Adr、Adr-dN4、Adr-N4-5、Adr-N4-6、Adr-N4-7體外轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后,均可以在293T細(xì)胞內(nèi)表達(dá),且Adr、Adr-N4-5、Adr-N4-7可將表達(dá)產(chǎn)物分泌到細(xì)胞外。ELISA及EISPOT結(jié)果表明:Adr免疫組小鼠抗-HBs終點滴度及表面抗原特異性分泌IFN-γ的脾細(xì)胞數(shù)量,均略高于其他免疫組小鼠,但與Adr-N4-5、Adr-N4-7相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),與Adr-dN4和Adr-N4-6組相比有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:在第5或7位氨基酸附加N-連接糖鏈,能修補(bǔ)或替代Asn4連接糖鏈引導(dǎo)MHBs分泌的功能。HBs表達(dá)蛋白分泌到細(xì)胞外對誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性細(xì)胞和體液免疫是至關(guān)重要的。
[Abstract]:Aim: to study the effects of N-glycosylation on protein expression in vitro, humoral immunity and cellular immune response in mice with hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) protein nucleic acid vaccine. Methods: by using site-directed mutagenesis technique in genetic engineering, the sugar chain attached to the fourth amino acid in the protein (MHBs) of hepatitis B virus surface antigen was removed, or the sugar chain was transferred to the 6th or 7th amino acid in turn. To construct a nucleic acid vaccine for N-glycosylation removal and translocation, named Adr-dN4,Adr-N4-5,Adr-N4-6,Adr-N4-7., respectively. 293T cells were transiently transfected with the above nucleic acid vaccine, wild type MHBs nucleic acid vaccine (pSW3891/MHBs/Adr, for short, Adr) and unloaded pSW3891, respectively. The expression of MHBs was detected by Western blot. BALB/c mice were immunized with each group of vaccines at the 4th and 6th week after intramuscular injection. The anti HBs antibody in serum was detected by ELISA method, and the number of spleen cells secreting IFN- 緯 by surface antigen polypeptide of mice was detected by ELISPOT method. Results: Western blot showed that Adr,Adr-dN4,Adr-N4-5,Adr-N4-6,Adr-N4-7 could be expressed in 293T cells after transfection in vitro, and Adr,Adr-N4-5, was expressed in 293T cells. The results of ELISA and EISPOT showed that the terminal titer of anti-HBs and the number of spleen cells secreting IFN- 緯 by surface antigen in Adr immunized mice were slightly higher than those in other immunized mice. But compared with Adr-N4-5,Adr-N4-7, there was no statistical difference (P0.05), and there was significant statistical difference compared with Adr-dN4 and Adr-N4-6 (P0.05). Conclusion: the addition of N-ligand sugar chain at the 5th or 7th amino acids can repair or replace the function of Asn4 ligand sugar chain leading to the secretion of MHBs. It is very important to induce specific cellular and humoral immunity by secreting the HBs expression protein out of cells.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染病科;美國馬薩諸塞州大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：江蘇省興衛(wèi)工程重點學(xué)科基金(G:xk200715)
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2410959