【摘要】：背景與目的：睪丸是典型的免疫豁免組織,卻能有效的清除感染的病原體,睪丸細胞的天然免疫防御功能長期受到研究者的關注,其調節(jié)機理有待進一步揭示。Toll樣受體(TLR)可以啟動睪丸體細胞的天然免疫反應,然而在生精細胞中的表達和功能尚未做深入研究。本論文旨在系統(tǒng)研究TLR3在生精細胞中的表達和功能。 材料與方法：分離止常C57BL/6小鼠各期生精細胞,使用其標記基因,包括精原細胞的標記基因Kit,精母細胞的標記基因聯(lián)會復合體蛋白(synaptonemal complex protein2,Scp2),精子細胞的標記基因魚精蛋白2(protamin2, Prm2);通過real-time RT-PCR,免疫組化及Western blotting技術分別在mRNA及蛋白水平上檢測TLR3在生精細胞中的表達；利用poly(I:C)激活生精細胞中的TLR3研究其在生精細胞中的功能及信號通路。吖啶橙／溴化乙錠(AO/EB)混合染色,TUNEL染色及流式細胞儀分析生精細胞的凋亡。 結果：發(fā)現(xiàn)小鼠生精細胞組成性的表達TLR3,主要定位于精原細胞和精母細胞,poly(I:C)可誘導精原和精母細胞產生多種炎癥因子(包括IL-1p,IL-6和TNF-a),1型干擾素(IFNa, IFNβ)及抗病毒蛋白(OAS1, PKR, MX1),這種作用依賴于NF-κB和IRF-3的激活。另外TLR3的激活還可以誘導生精細胞的凋亡,這種作用可能是通過上調TNF-α實現(xiàn)的。體外實驗證明TNF-α表現(xiàn)出雙重功能：低濃度的TNF-α可以抑制生精細胞的凋亡,而高濃度的TNF-α可以促進生精細胞的凋亡。 結論：TLR3表達于精原與精母細胞,生精細胞中TLR3的激活可以行使兩方面的功能：一方面啟動生精細胞抗病毒的天然免疫反應,另一方面可以誘導生精細胞的凋亡。為病毒感染干擾精子發(fā)生的機理提供了新的線索。
[Abstract]:Background & objective: testis are typical immune exempted tissues, but they can effectively remove the infected pathogens. The innate immune defense function of testicular cells has been concerned by researchers for a long time. Toll like receptor (TLR) can initiate the innate immune response of somatic cells in testis, but its expression and function in spermatogenic cells have not been further studied. The purpose of this thesis is to study the expression and function of TLR3 in spermatogenic cells. Materials and methods: spermatogenic cells of normal C57BL/6 mice were isolated and labeled with their marker genes, including the marker gene of spermatogonial Kit, (synaptonemal complex protein2,Scp2. Sperm cell labeled gene protamine 2 (protamin2, Prm2); The expression of TLR3 in spermatogenic cells was detected by real-time RT-PCR, immunohistochemistry and Western blotting technique at the level of mRNA and protein respectively. Poly (I: C) was used to activate TLR3 in spermatogenic cells to study its function and signal pathway in spermatogenic cells. Acridine orange / ethidium bromide (AO/EB) mixed staining, TUNEL staining and flow cytometry were used to analyze the apoptosis of spermatogenic cells. Results: the constitutive expression of TLR3, in mouse spermatogenic cells was mainly localized in spermatogonia and spermatocyte, poly (I: C), which could induce the production of many inflammatory factors (including IL-1p,IL-6 and TNF-a) in spermatogonial and spermatogenic cells. Type 1 interferon (IFNa, IFN 尾) and antiviral protein (OAS1, PKR, MX1), which depends on the activation of NF- 魏 B and IRF-3. In addition, the activation of TLR3 can also induce the apoptosis of spermatogenic cells, which may be achieved by upregulating TNF- 偽. In vitro experiments showed that TNF- 偽 had dual functions: low concentration of TNF- 偽 could inhibit the apoptosis of spermatogenic cells, while high concentration of TNF- 偽 could promote the apoptosis of spermatogenic cells. Conclusion: TLR3 is expressed in spermatogonial and spermatogenic cells. The activation of TLR3 in spermatogenic cells can perform two functions: on the one hand, it can activate the innate immune response of spermatogenic cells against virus, on the other hand, it can induce the apoptosis of spermatogenic cells. It provides a new clue for virus infection to interfere the mechanism of spermatogenesis.
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R321

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