發(fā)布時間：2018-12-28 18:12

【摘要】：目的：探索新西蘭大白兔尿道狹窄模型建立的方法。 方法：將12只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分成兩組,每組6只,平均體重2.84±0.15kg。A組為正常對照組。B組為尿道狹窄組：在戊巴比妥鈉溶液靜脈注射麻醉后,剝除1.0cm左右尿道粘膜,逐層縫合后留置F-8橡皮導(dǎo)尿管并固定。所有操作均在10倍光鏡下,運(yùn)用顯微器械完成。術(shù)后觀察兩組實(shí)驗(yàn)兔,在飼養(yǎng)2個月時分別行順行膀胱尿道造影、尿道測壓和組織細(xì)胞學(xué)檢測。術(shù)中和術(shù)后一周腹腔注射抗生素以預(yù)防感染。 結(jié)果：B組1只新西蘭大白兔在麻醉后腹腔注射抗生素時出現(xiàn)休克表現(xiàn),搶救無效死亡。在補(bǔ)充一只尿道狹窄組大白兔后,兩組實(shí)驗(yàn)兔均順利完成實(shí)驗(yàn)。術(shù)后1周左右,留置導(dǎo)尿管自行脫落。觀察發(fā)現(xiàn)B組術(shù)后兩個月后明顯較第一組焦躁。 (1)膀胱尿道造影：術(shù)后兩個月順行膀胱尿道造影尿道狹窄組較對照組有明顯狹窄,尿道管腔變細(xì),粘膜粗糙不連續(xù)。 (2)尿道測壓：A組(正常對照組)手術(shù)部位尿道壓為14.67±2.16cmH20,B組(尿道狹窄組)手術(shù)部位尿道壓為27.83±3.71cmH20,兩者比較有明顯差異(p0.01)。 (3)組織細(xì)胞學(xué)：HE染色提示,A組尿道上皮細(xì)胞均勻覆蓋,層數(shù)3-4層,排列規(guī)則,未見炎性細(xì)胞；B組尿道有少量上皮細(xì)胞不均勻覆蓋,個別地方?jīng)]有上皮細(xì)胞,中間有中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞分布。 結(jié)論：運(yùn)用顯微外科技術(shù)進(jìn)行局部尿道粘膜剝除術(shù)可以成功制造出新西蘭大白兔尿道狹窄模型,并且具有很好的穩(wěn)定性、可重復(fù)性以及狹窄段長度的可控性。膀胱尿道造影、尿道測壓和組織細(xì)胞學(xué)是鑒定尿道狹窄比較可靠的方法。 目的：研究兔尿道上皮細(xì)胞體外的培養(yǎng)擴(kuò)增情況以及在多孔絲素蛋白支架上的生長情況,探索適合尿道上皮細(xì)胞生長的支架孔徑和實(shí)驗(yàn)環(huán)境。 方法：(1)新西蘭大白兔尿道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定。提取新西蘭大白兔尿道粘膜,通過漂洗、消化、靜置、過濾、離心、懸浮、培養(yǎng)等步驟進(jìn)行尿道上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng),經(jīng)傳代后用相差顯微鏡和免疫組化角蛋白抗體進(jìn)行尿道上皮細(xì)胞的鑒定；(2)按照不同孔徑分成三組：A組,多孔絲素蛋白支架孔徑為20u m；B組,孔徑為40μm；C組,孔徑為80μm；(3)在相同實(shí)驗(yàn)環(huán)境下,將尿道上皮細(xì)胞接種到三組多孔絲素蛋白支架上,3天后用掃描電鏡和光譜分析儀檢測細(xì)胞代謝產(chǎn)物來觀察各組細(xì)胞的生長情況。 結(jié)果：(1)順利提取新西蘭大白兔的尿道粘膜,并完成體外原代和傳代培養(yǎng),用相差顯微鏡和免疫組化角蛋白抗體的方法鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞為尿道上皮細(xì)胞；(2)將傳代的尿道上皮細(xì)胞植入3組多孔絲素蛋白支架培養(yǎng)后,光譜分析儀在檢測細(xì)胞代謝產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)A組(孔徑為20μm)的細(xì)胞代謝最旺盛,而且掃描電鏡也發(fā)現(xiàn)A組的多孔絲素蛋白支架上有尿道上皮細(xì)胞生長。 結(jié)論：取材于新西蘭大白兔尿道粘膜的尿道上皮細(xì)胞可在體外培養(yǎng)擴(kuò)增,并且在孔徑為20μm的片狀多孔絲素蛋白支架上能夠生長。 目的：初步探索片狀多孔絲素蛋白支架在動物體內(nèi)的降解情況。 方法：(1)將孔徑為20μm的片狀多孔絲素蛋白支架修剪成10*10*21mm(長*寬*高)方形小塊共18枚,6枚一組植入新西蘭大白兔背部皮下；(2)術(shù)后第2、4、8周,切開每只實(shí)驗(yàn)兔的2個切口,取出絲素蛋白小塊。測量絲素蛋白小塊的大小,觀察絲素蛋白與宿主的反應(yīng)。 結(jié)果：(1)體積上-——第2周,6片絲素蛋白小塊基本都呈原來的形狀,平均體積約為156±9.30mm3(較基線周體積縮小了17.89%),與基線周相比,有明顯差異(p=0.014)；第4周,6片絲素蛋白小塊均失去原來形狀,呈不規(guī)則形,平均體積約為38.33±14.56mm3(較基線周體積縮小了80.00%),與基線周相比,有明顯差異(p0.001)；第8周,6片絲素蛋白小塊呈不規(guī)則形,平均體積約為7.00±2.00mm3(較基線周體積縮小了96.32%),與基線周相比,有明顯差異(p0.001)。；(2)形態(tài)上——第2周,6片絲素蛋白小塊基本都呈原來的形狀,并且與周圍組織無明顯粘連,容易分離；第4周,6片絲素蛋白小塊均失去原來形狀,呈不規(guī)則形,與周圍組織有粘連溶解,易分離；第8周,6片絲素蛋白小塊呈不規(guī)則形,明顯變小但未完全降解,與周圍組織粘連溶解不易分離。 結(jié)論：20μm孔徑的絲素蛋白在實(shí)驗(yàn)兔體內(nèi)8周時,體積縮小約96.32%,但同時伴局部的粘連和溶解。 目的：初步探索用片狀多孔絲素蛋白支架修補(bǔ)長段尿道狹窄和缺損。 方法：(1)將24只新西蘭雄性大白兔隨機(jī)分成4組：A組為正常對照組；B組為尿道狹窄組——剝除實(shí)驗(yàn)兔的尿道粘膜,不做修補(bǔ),讓其自行愈合；C組為多孔絲素蛋白支架組——剝除實(shí)驗(yàn)兔的尿道粘膜后,用多孔絲素蛋白支架進(jìn)行修補(bǔ)；D組為尿道上皮細(xì)胞／多孔絲素蛋白支架復(fù)合物組——剝除實(shí)驗(yàn)兔的尿道粘膜后,用尿道上皮細(xì)胞-多孔絲素蛋白支架復(fù)合物進(jìn)行修補(bǔ)。每組各6只,平均體重(2.87±0.16)kg；(2)4組共同飼養(yǎng)2個月后,分別進(jìn)行膀胱尿道造影、尿動力檢測(尿道測壓)和組織細(xì)胞學(xué)檢測,以觀察片狀多孔絲素蛋白支架以及尿道上皮細(xì)胞-多孔絲素蛋白支架復(fù)合物在修補(bǔ)長段尿道狹窄和缺損中的作用。 結(jié)果：A組6只實(shí)驗(yàn)兔完成2個月的實(shí)驗(yàn)。B組1只實(shí)驗(yàn)兔在行尿道剝離術(shù)時,腹腔注射頭孢三嗪5分鐘后出現(xiàn)休克表現(xiàn)死亡,補(bǔ)充1只實(shí)驗(yàn)兔后,6只實(shí)驗(yàn)兔完成2個月的實(shí)驗(yàn)。C組有1只實(shí)驗(yàn)兔在6周時出現(xiàn)死亡,其余5只完成實(shí)驗(yàn)。D組有1只實(shí)驗(yàn)兔在第4周時,多孔絲素蛋白支架復(fù)合物脫出,退出實(shí)驗(yàn)；另有1只實(shí)驗(yàn)兔在第5周時出現(xiàn)死亡,其余4只完成實(shí)驗(yàn)。 (1)尿道造影——術(shù)后2月,B組的造影片顯示尿道粘膜連續(xù)性的改變,尿道管徑變細(xì),造影劑通過時不連貫,呈現(xiàn)尿道狹窄的表現(xiàn),與A組相比有明顯的尿道狹窄表現(xiàn)。C、D組膀胱尿道造影提示雖然尿道粘膜的連續(xù)性及管腔的直徑都較A組有所加劇,但與B組相比,尿道粘膜的連續(xù)性及管腔的直徑都有所好轉(zhuǎn)。C組和D組之間,視覺上兩組的尿道粘膜連續(xù)性及尿道管腔的大小無明顯差異. (2)尿道測壓——B、C、D組術(shù)后2月手術(shù)部位的尿道阻力明顯增高,平均值分別為27.83±3.71cmH2O、18.00±1.87cmH2O、18.00±1.41cmH20,A組尿道阻力的平均值為14.67±2.16cmH20,后3組分別與A組相比均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。C組和D組分別與B組也有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01)。但是,C組和D組的尿道阻力平均值之間無明顯差異(p=1.00)。尿道測壓圖上,A照組則呈現(xiàn)平緩的低壓波形；B組尿道手術(shù)部位呈現(xiàn)明顯的密集高壓波形；C、D組的手術(shù)區(qū)域的尿道阻力波形相似,均較B組低緩。 (3)組織細(xì)胞學(xué)——HE染色提示,A組尿道上皮細(xì)胞均勻覆蓋,層數(shù)3-4層,排列規(guī)則,未見炎性細(xì)胞；B組尿道有少量上皮細(xì)胞不均勻覆蓋,個別地方?jīng)]有上皮細(xì)胞,中間有中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞分布；C組尿道上皮細(xì)胞均勻覆蓋,層數(shù)4-5層,有炎性細(xì)胞；D組尿道上皮細(xì)胞均勻覆蓋,層數(shù)4-5層,排列規(guī)則,偶見少量炎性細(xì)胞.。C組和D組與B組相比有明顯的修復(fù)效果,而C組和D組之間無明顯差異 結(jié)論：通過對4組實(shí)驗(yàn)兔的比較研究,我們可以初步得出：運(yùn)用多孔絲素蛋白支架作為長段尿道缺損的修補(bǔ)替代材料,可以對尿道狹窄有明顯的改善作用。但是尿道上皮細(xì)胞／多孔絲素蛋白支架復(fù)合物對長段尿道狹窄的改善程度沒有明顯優(yōu)于單純多孔絲素蛋白支架對長段尿道狹窄的修復(fù)。尿道修復(fù)段的炎癥反應(yīng)并不明顯。
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【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R-332;R695

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號：2394262