天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

補體調(diào)節(jié)蛋白CD59 CD46在T細(xì)胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用研究

發(fā)布時間:2018-12-25 09:56
【摘要】:目的:本研究采用siRNA技術(shù),構(gòu)建pSUPER-siCD46重組質(zhì)粒,與本室保存的pSUPER-siCD59重組質(zhì)粒,觀測CD46和CD59特異性沉默對T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響,旨在探討CD59與CD46在T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的協(xié)同效應(yīng)。 方法:構(gòu)建pSUPER-siCD46重組質(zhì)粒,利用PCR、質(zhì)粒雙酶切及DNA測序?qū)ζ溥M行鑒定。應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞,將細(xì)胞分為未轉(zhuǎn)染的Jurkat細(xì)胞(Ⅰ組)、轉(zhuǎn)染pSUPER空質(zhì)粒Jurkat細(xì)胞(Ⅱ組)、轉(zhuǎn)染pSUPER-siCD59重組質(zhì)粒Jurkat細(xì)胞(Ⅲ組)和轉(zhuǎn)染pSUPER-siCD46重組質(zhì)粒Jurkat細(xì)胞(Ⅳ組),G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆。采用RT-PCR、 Westernblot檢測各組細(xì)胞中CD46和CD59基因的表達(dá)。應(yīng)用CD59、CD46的單克隆抗體聯(lián)合作用于各組Jurkat細(xì)胞,MTT法測細(xì)胞增殖、Western Blot測ZAP-70磷酸化的水平。結(jié)果:經(jīng)PCR、限制性內(nèi)切酶雙酶切及測序鑒定,結(jié)果表明重組質(zhì)粒序列插入正確。重組質(zhì)粒pSUPER-siCD59和pSUPER-siCD46分別轉(zhuǎn)染的Jurkat細(xì)胞,可表達(dá)綠色熒光蛋白,經(jīng)G418篩選,得到陽性細(xì)胞克;RT-PCR結(jié)果顯示:Ⅲ組CD59mRNA和Ⅳ組CD46mRNA的表達(dá)均被明顯抑制,與Ⅰ、Ⅱ組相比較(P0.05),差異有顯著性。CD59mAb、CD46mAb聯(lián)合作用于T細(xì)胞,Ⅰ組細(xì)胞的增殖能力,ZAP-70磷酸化條帶的灰度值明顯高于Ⅲ、Ⅳ組,差異有顯著性(P0.05),,其中Ⅱ組低于Ⅲ組(P0.05),差異有顯著性,但Ⅰ、Ⅱ組之間比較(P0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論:成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒PSUPER-siCD46;分別建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pSUPER-siCD59、 pSUPER-siCD46的Jurkat細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng);RT-PCR實驗從mRNA水平證明重組質(zhì)粒PSUPER-siCD59和pSUPER-siCD46可分別特異性地沉默CD59基因和CD46基因;通過MTT、 Western Blot實驗證實,在CD59與CD46的共同作用下,Jurkat細(xì)胞的增殖、ZAP-70的磷酸化顯著增強,由此證明CD59、CD46在T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中存在協(xié)同作用。該研究創(chuàng)新之處在于,為跨膜蛋白CD46在GPI錨固蛋白CD59的T細(xì)胞跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用提供了實驗依據(jù),為T細(xì)胞白血病的基因靶向治療開辟了一條新的途徑,具有重要的理論意義及廣闊的臨床應(yīng)用前景。
[Abstract]:Aim: to construct pSUPER-siCD46 recombinant plasmid by using siRNA technique, and to observe the effect of CD46 and CD59 specific silencing on T cell signal transduction. The purpose of this study was to investigate the synergistic effect of CD59 and CD46 in T cell signal transduction. Methods: pSUPER-siCD46 recombinant plasmid was constructed and identified by double digestion of PCR, plasmid and DNA sequencing. Jurkat cells were transfected with cationic liposome. The cells were divided into untransfected Jurkat cells (group 鈪,

本文編號:2391023

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/xiyixuelunwen/2391023.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶dbba6***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
日韩一区二区三区久久| 日韩1区二区三区麻豆| 97人妻精品一区二区三区男同| 国产精品免费无遮挡不卡视频| 欧美日韩亚洲国产av| 老司机精品视频免费入口| 丁香六月婷婷基地伊人| 午夜传媒视频免费在线观看| 人妻乱近亲奸中文字幕| 91精品国产品国语在线不卡| 色婷婷在线视频免费播放| 成人日韩在线播放视频| 日韩特级黄色大片在线观看| 国产日韩综合一区在线观看| 白丝美女被插入视频在线观看| 开心激情网 激情五月天| 亚洲中文字幕综合网在线 | 午夜精品一区免费视频 | 亚洲一区二区三区免费的视频| 欧美极品欧美精品欧美| 色哟哟哟在线观看视频| 91人妻人人澡人人人人精品| 自拍偷女厕所拍偷区亚洲综合| 中文字幕精品一区二区三| 国产亚洲精品久久99| 成人免费视频免费观看| 在线免费不卡亚洲国产| 国产中文字幕久久黄色片| 男生和女生哪个更好色| 欧美二区视频在线观看| 日韩黄色一级片免费收看| 午夜直播免费福利平台| 久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲专区中文字幕在线| 在线免费观看黄色美女| 日韩欧美一区二区亚洲| 日韩亚洲激情在线观看| 日本不卡在线一区二区三区| 国产户外勾引精品露出一区| 精品一区二区三区不卡少妇av| 国产成人精品一区在线观看|