【摘要】：目的：建立穩(wěn)定的血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)活性檢測方法,結合血管性血友病因子(VWF)檢測,對造血干細胞移植(HSCT)患者各個時期(移植預處理前,預處理后,造血重建及造血重建后)的ADAMTS13活性進行觀察。探討ADAMTS13和VWF在造血干細胞移植患者各個時期的變化及相互作用,評估ADAMTS13和VWF檢測的臨床意義。 方法：(1)建立FRETS-VWF73熒光底物檢測法,對18例特發(fā)性血栓性血小板減少性紫癜(TTP)患者血漿ADAMTS13活性進行檢測,并將其與殘余膠原結合試驗進行對比分析。正常對照為18例健康獻血員,性別年齡與TTP組匹配。 (2)移植病例：取自2010年09月至2011年09月間我院行HSCT的血液系統疾病患者共113例(男66例,女47例),中位年齡32(4～57)歲。按疾病診斷分：急性髓細胞性白血病(AML)39例,急性淋巴細胞性白血病(ALL)24例,慢性髓細胞性白血病(CML)16例,急性雜合細胞性白血病(AHL)4例,淋巴瘤13例,其他17例。按移植類型分：自體移植16例、異基因移植97例(同胞全相合移植48例、無關供體全相合移植30例、單倍體移植10例,臍血干細胞移植9例)。按造血干細胞來源分：外周造血干細胞移植62例,骨髓造血干細胞移植31例,外周聯合骨髓造血干細胞移植11例,臍血移植9例。預處理根據移植類型分別采取改良BUCY, TBI+CY, BEAM等方案。 (3)移植病人標本采集及檢測：采集造血干細胞移植患者各個時期(移植預處理前,預處理后,造血重建及造血重建后)枸櫞酸鈉抗凝血漿,建立并采用FRETS-VWF73熒光試驗檢測血漿ADAMTS13活性,ELISA法檢測VWF抗原量。 (4)統計分析：數據采用均數±標準差表示,組間均數比較采用方差分析,兩樣本平均值的比較采用t檢驗,率的比較采用卡方(X2)檢驗,以P0.05為差異有統計學意義,選用Logistic回歸模型分析相關性,采用的統計學軟件為SAS9.3。 結果：(1)經FRETS-VWF73檢測,18例臨床診斷為TTP的患者血漿ADAMTS13活性均10%,平均ADAMTS13活性為(4.2±1.3)%,正常對照組平均ADAMTS13活性(77.0±48.0)%,兩組間差異有統計學意義(P0.001)。與殘余膠原結合試驗結果(ADAMTS13活性均5%)基本相符。 (2)113例造血干細胞移植患者各時期(移植預處理前,預處理后,造血重建及造血重建后)的ADAMTS13活性平均值分別為(45.1±30.6)%、(38.3±26.3)%、(43.5±29.5)%、(55.4±38.0)%,均較正常對照減低(P0.05),預處理結束后ADAMTS13活性均值較預處理前減低(F=13.08,P=0.0004)。活性減低在預處理前30%以內的有31例(27.4%),減低范圍在30-60%的27例(23.9%),60%以上的患者有9例(8.0%)。與各個時期相對應,測得VWF抗原平均值分別為(64.7±63.9)%、(114.7±103.0)%、(204.8±190.5)%、(207.8±189.1)%,與ADAMTS13活性相反,除預處理后外,各時期VWF抗原含量均高于正常對照組(P0.05),同時移植預處理結束后VWF抗原含量較預處理前增高(F=16.45,P0.0001)。 (2)113例患者中,8例患者后期發(fā)生了包括VOD、TMA、肺栓塞等在內的血栓并發(fā)癥,ADAMTS13活性在預處理前后的平均值分別為(77.6±71.1)%、(41.6±39.5)%,差異有統計學意義(F=6.07,P=0.0432),相應的VWF抗原量為(762.3±751.8)%、(1088.1±981.6)%。3例患者在移植預處理結束后ADAMTS13活性減低超過預處理前的60%,占血栓組37.5%,該比例較非血栓組(9.0%)有差異(X2=10.2458,P=0.0014)。Logistic回歸分析表明,造血干細胞預處理后ADAMTS13活性下降超過預處理前60%,后期發(fā)生血栓的風險是對照組的9.903倍(P=0.0065,OR=9.903,95%CI：1.899～51.644)。 (3)97例異基因造血干細胞移植患者中有49例(50.5%)患者后期發(fā)生發(fā)生急性移植物抗宿主病(aGVHD),其中Ⅰ度23例,Ⅱ度以上26例,預處理前后ADAMTS13活性平均值為(48.1±35.1)%、(46.4±30.4)%。其中25例患者在預處理后ADAMTS13活性發(fā)生了不同程度減低,但Logistic回歸分析表明,預處理后ADMTS13活性下降不是移植后期發(fā)生aGVHD的危險因素(P=0.6737,OR=1.195,95%CI：0.522～2.732)。 49例患者著中有35例在aGVHD發(fā)生時進行ADAMTS13活性檢測。在aGVHD發(fā)生時18例(51.4%)患者預處理前及aGVHD發(fā)生時ADAMTS13活性均值分別為(41.5±28.3)%、(22.7±19.9)%,aGVHD發(fā)生時ADAMTS13活性較預處理前發(fā)生了減低(F=22.34,P=0.0002),同時體內VWF抗原含量升高(F=17.56,P=0.0004),兩時期的VWF抗原量均值為(220.1±216.7)%、(539.4±407.0)%。 結論：(1)FRETS-VWF73熒光試驗檢測ADAMTS13活性靈敏可靠、操作簡便、能進行定量分析,可作為常規(guī)檢測項目應用于TTP及其他病人的血漿ADAMTS13活性臨床檢測。 (2)造血干細胞移植早期各階段ADAMTS13平均活性水平都要低于正常人,而在預處理后ADAMTS13平均活性水平較預處理前低,以活性減低在60%內的為主,隨著造血重建,患者血漿ADAMTS13活性開始回升。 (3)血栓并發(fā)癥患者預處理后ADAMTS13活性減低較非血栓組明顯,下降幅度超過60%是后期發(fā)生血栓并發(fā)癥的危險因素。預處理后ADAMTS13活性較減低與aGVHD的發(fā)生無關,在aGVHD發(fā)生當時僅部分患者ADAMTS13活性減低。 (4)VWF抗原呈逐步增高趨勢,血栓患者移植前的VWF就已經處于較高水平。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R341

【共引文獻】

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本文編號：2390039