【摘要】：目的觀察ROCK抑制劑Y-27632對體外缺血清培養(yǎng)的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡的影響。方法原代分離培養(yǎng)小鼠骨髓單個核細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞CD29、CD44、CD90、CD34表面標(biāo)志進(jìn)行檢測。成骨、成脂肪、成軟骨分化后分別進(jìn)行茜素紅、油紅O及甲苯胺藍(lán)染色。將第3代細(xì)胞隨機(jī)分為3組:對照組、模型組(無血清)、Y-27632組(無血清+10μmol/L Y-27632),分別于培養(yǎng)后24、48、72 h收集細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀TUNEL法觀察各組細(xì)胞凋亡率,培養(yǎng)后24 h Western blot法檢測ROCK1及cleaved caspase 3表達(dá)。結(jié)果分離的骨髓單個核細(xì)胞CD29(+)、CD44(+)、CD90(+)、CD34(-),三系分化后茜素紅染色(+),油紅O染色(+),甲苯胺藍(lán)染色(+)。Y-27632能明顯降低由于缺血清培養(yǎng)導(dǎo)致的BMSCs的凋亡率(P0.01),Y-27632能夠明顯降低ROCK及cleaved-caspase 3表達(dá)(P0.01)。結(jié)論分離的骨髓單個核細(xì)胞就是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。Y-27632能夠抑制由于缺血清培養(yǎng)導(dǎo)致的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:Objective to observe the effect of Y-27632, a ROCK inhibitor, on apoptosis of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) cultured in vitro. Methods Murine bone marrow mononuclear cells were isolated and cultured in primary culture. The surface markers of CD29,CD44,CD90,CD34 were detected by flow cytometry. After osteogenesis, fat formation and cartilage differentiation, alizarin red, oil red O and toluidine blue were stained respectively. The third passage cells were randomly divided into three groups: control group, model group (without serum) and Y-27632 group (without serum 10 渭 mol/L Y-27632). The apoptosis rate of each group was observed by flow cytometry (TUNEL) at 24 渭 mol/L 872 h after culture. The expression of ROCK1 and cleaved caspase 3 were detected by 24 h Western blot method. Results CD29 (), CD44 (), CD90 (), CD34 (-) was isolated from bone marrow mononuclear cells and (), was stained by alizarin red (), oil red O after differentiation. Toluidine blue staining with (). Y-27632 significantly decreased the apoptosis rate of BMSCs induced by ischemia culture (P0.01), and Y-27632 significantly decreased the expression of ROCK and cleaved-caspase 3 (P0.01). Conclusion the isolated bone marrow mononuclear cells are bone marrow mesenchymal stem cells and Y-27632 can inhibit the apoptosis of mouse bone marrow mesenchymal stem cells induced by ischemia culture.
【作者單位】： 云南省第一人民醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科;昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外二科;昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科;
【基金】：云南省衛(wèi)計委內(nèi)設(shè)研究機(jī)構(gòu)項目(編號:2011WS0033) 西南醫(yī)科大學(xué)校內(nèi)基金(編號:15041)
【分類號】：R329.2

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