【摘要】：目的: 通過重組布魯菌BP26蛋白與鋁佐劑和CpG佐劑聯(lián)用分別免疫Balb/c小鼠和豚鼠,從細(xì)胞免疫及體液免疫兩方面評價布魯菌重組BP26亞單位疫苗生物學(xué)活性,以及布魯菌攻擊實驗評價其免疫保護效果;為新型布魯菌疫苗的研制提供實驗依據(jù)。 方法: 1、布魯菌BP26蛋白的小鼠免疫評價: ①以布魯菌BP26蛋白及分別聯(lián)合鋁佐劑、CpG佐劑免疫小鼠,分別設(shè)立NS組,鋁佐劑組,CpG佐劑組,BP26蛋白+鋁佐劑組,BP26蛋白+ CpG佐劑組。分別于0d,14d肌肉注射免疫各組小鼠后,檢測小鼠機體的細(xì)胞免疫反應(yīng)及體液免疫反應(yīng); ②MTT法檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖; ③流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠外周血淋巴細(xì)胞亞類分群; ④ELISpot方法檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌; ⑤ELISpot方法檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-4的分泌; ⑥ELISA方法檢測小鼠血清總IgG抗體水平; ⑦ELISA方法檢測小鼠血清抗體亞類IgG1,IgG2a; ⑧用牛種布魯菌104M菌株(Brucella abortus,104M)對免疫后的小鼠進行攻擊實驗,觀察疫苗的保護效果。 2、布魯菌BP26蛋白豚鼠的免疫評價: ①以布魯菌BP26蛋白及分別聯(lián)合鋁佐劑、CpG佐劑免疫豚鼠,分別設(shè)立NS組,鋁佐劑組,CpG佐劑組,BP26蛋白+鋁佐劑組,BP26蛋白+ CpG佐劑組。分別于0d,14d肌肉注射免疫豚鼠; ②豚鼠皮膚試驗檢測豚鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng); ③ELISA方法檢測豚鼠血清總IgG抗體水平。 結(jié)果: 1、布魯菌BP26蛋白小鼠免疫評價檢測結(jié)果: ①小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實驗結(jié)果:BP26蛋白組、BP26蛋白+鋁佐劑組和BP26蛋白+CpG佐劑組小鼠與相應(yīng)對照組NS組,鋁佐劑組和CpG佐劑組比較,疫苗組小鼠淋巴細(xì)胞分別經(jīng)BP26蛋白、Br.PPD和布魯菌可溶性蛋白體外刺激后,刺激指數(shù)(SI)明顯高于對照組(p0.05); ②ELISpot檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞IFN-γ分泌的結(jié)果:疫苗組小鼠淋巴細(xì)胞在經(jīng)BP26蛋白和Br.PPD體外刺激后IFN-γ的分泌多于對照組(p0.05); ③ELISpot檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-4分泌的結(jié)果:BP26+鋁佐劑組的斑點數(shù)明顯高于其他各組(p0.05),其余各組間無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05); ④流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠外周血淋巴細(xì)胞分群結(jié)果:BP26蛋白組和BP26+鋁佐劑組小鼠外周血中CD4~+淋巴細(xì)胞比例增高,CD4~+/CD8~+比值高于NS組及鋁佐劑組(p0.05),而BP26蛋白+CpG組小鼠外周血中CD8~+淋巴細(xì)胞比例增加,CD4~+/CD8~+比值低于CpG組(p0.05); ⑤ELISA檢測小鼠血清總IgG抗體效價結(jié)果:BP26組與BP26~+CpG組效價均為1:3200,BP26+Al組效價為1:29405; ⑥ELISA檢測小鼠血清抗體亞類效價結(jié)果:IgG1與IgG2a的效價均以BP26+Al免疫組最高,IgG1效價為1:67558,IgG2a效價為1:8445,IgG1 /IgG2a1; ⑦布魯菌攻擊小鼠實驗結(jié)果:BP26蛋白免疫組與NS組比較,脾臟細(xì)菌定值數(shù)減少。BP26~+CpG組小鼠脾菌數(shù)與CpG組比較有減少,p0.05。 2、布魯菌BP26蛋白豚鼠免疫評價檢測結(jié)果: ①豚鼠皮膚實驗結(jié)果:BP26、BP26+Al和BP26+CpG組紅腫直徑都大于10mm,而鹽水組豚鼠無法檢測到紅腫,統(tǒng)計學(xué)有差異性; ②ELISA檢測豚鼠血清總IgG抗體:疫苗組豚鼠血清A450值在1.46-2.41之間,而對照組豚鼠血清A450值僅為0.4-0.6,疫苗組與對照組差異有顯著性,p0.05。 結(jié)論: 1、BP26蛋白能激活小鼠機體免疫系統(tǒng),包括細(xì)胞免疫和體液免疫。 2、BP26蛋白+鋁佐劑和BP26+CpG對小鼠的體液免疫及細(xì)胞免疫的刺激效應(yīng)均強于不含佐劑的BP26蛋白。BP26+鋁佐劑刺激的體液免疫強于BP26 +CpG,而BP26 +CpG刺激的細(xì)胞免疫反應(yīng)強于其對體液免疫的刺激。 3、BP26蛋白+CpG具有較強的免疫保護作用,小鼠脾臟細(xì)菌定植數(shù)最少。 4、通過免疫豚鼠,證明免疫BP26的豚鼠不僅其血清抗體滴度高,而且能夠形成明顯的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),提示BP26蛋白激活了豚鼠的免疫系統(tǒng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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本文編號：2367019