【摘要】：目的探索人胎腦神經(jīng)干細胞的體外分離培養(yǎng)條件,從而在體外大量增殖神經(jīng)干細胞,并觀察神經(jīng)干細胞增殖和分化的特點。方法采用含堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和表皮細胞生長因子(EGF)的無血清培養(yǎng)技術(shù),從14周自愿水囊引產(chǎn)人胎腦海馬皮質(zhì)中分離出神經(jīng)干細胞,并進行培養(yǎng)、傳代、分化觀察,應(yīng)用免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)對培養(yǎng)的細胞及其分化的細胞進行鑒定。結(jié)果從14周人胎腦皮質(zhì)中成功分離出具有自我更新和多分化潛能的神經(jīng)干細胞,在無血清培養(yǎng)時細胞呈懸浮狀態(tài)生長,形成神經(jīng)球,該細胞具有連續(xù)增殖能力,可傳代培養(yǎng),表達神經(jīng)巢蛋白抗原(Nestin);在含血清培養(yǎng)時誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞分化,分化后的細胞表達神經(jīng)元細胞和膠質(zhì)細胞的特異性抗原。結(jié)論在含有EGF和bFGF的無血清培養(yǎng)液中,從人胎腦能分離培養(yǎng)出具有自我復(fù)制和分化潛能的神經(jīng)干細胞,并能在體外擴增,可進一步用于基礎(chǔ)及臨床研究。
[Abstract]:Objective to explore the conditions of isolation and culture of neural stem cells from human fetal brain in vitro, so as to proliferate neural stem cells in vitro and observe the characteristics of proliferation and differentiation of neural stem cells. Methods using serum-free culture technique containing basic fibroblast growth factor (bFGF) and epidermal growth factor (EGF), neural stem cells (NSCs) were isolated from the cortex of human fetal brain induced by 14 weeks of voluntary water sac, and were cultured and subcultured. The cultured cells and the differentiated cells were identified by immunofluorescence cytochemistry. Results the neural stem cells with self-renewal and multi-differentiation potential were successfully isolated from the human fetal cerebral cortex at the 14th week. The cells grew in suspension state and formed a neurosphere in serum-free culture. The cells had the ability of continuous proliferation and could be subcultured. Expression of nestin antigen (Nestin); The differentiation of neural stem cells was induced by serum-containing culture. The differentiated cells expressed specific antigens of neuronal cells and glial cells. Conclusion in serum-free medium containing EGF and bFGF, neural stem cells with self-replication and differentiation potential can be isolated from human fetal brain and can be amplified in vitro, which can be further used in basic and clinical research.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬安慶醫(yī)院神經(jīng)外科;安慶師范學(xué)院生命科學(xué)系;
【分類號】：R329

【二級參考文獻】

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1 周細中,封志純,王斌,安艦,李進;人胎腦Nestin陽性神經(jīng)元的發(fā)育[J];中國當代兒科雜志;2003年04期

2 尹曉娟,杜江,封志純;人不同胎齡胎腦海馬神經(jīng)干細胞發(fā)育規(guī)律初探[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年22期

3 尹曉娟,封志純;人胎腦海馬部位神經(jīng)干細胞形態(tài)學(xué)觀察[J];臨床兒科雜志;2004年12期

4 尹曉娟,封志純;神經(jīng)干細胞及其應(yīng)用前景[J];中國臨床康復(fù);2004年04期

5 尹曉娟,封志純,杜江;分離培養(yǎng)不同胚齡人神經(jīng)干細胞的方法比較[J];中國臨床康復(fù);2004年09期

6 孫鵬,鄒春林,董愷,張愚;人胚海馬神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)及分化研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2005年07期

7 尹曉娟,封志純,杜江;人胎腦皮質(zhì)神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J];中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2004年11期

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2 尹曉娟;巨容;封志純;;32周胎齡人胎腦神經(jīng)干細胞發(fā)育狀態(tài)的研究[J];中國小兒急救醫(yī)學(xué);2006年05期

3 尹曉娟;封志純;;36周胎齡人胎腦不同部位神經(jīng)干細胞變化特征研究[J];臨床兒科雜志;2006年10期

4 姚瑞芹,徐鐵軍,張鳳真;不同生長因子對人胚胎腦海馬區(qū)神經(jīng)干細胞體外生長的影響[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2005年02期

5 陳玲,陳景剛,唐洲平,張廣慧,徐光錦,朱遂強;不同培養(yǎng)條件下胚胎神經(jīng)干細胞分化細胞中神經(jīng)元所占比例的比較[J];中國康復(fù);2005年02期

6 崔景彬,王俊萍,李開榮,鄢文海,王琳娜;維甲酸誘導(dǎo)大鼠胚胎腦神經(jīng)干細胞P450RAI基因的表達[J];解剖學(xué)報;2003年04期

7 孫劍瑞,楊波,杜英,宋來君,李國喜,張清勇,胡祥,胡平生,徐虹,王云龍;酵素-Ⅱ分離人神經(jīng)干細胞球[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年03期

8 金澎;細胞替代治療與神經(jīng)干細胞[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

9 王飛,黃強,王愛東,蘭青,孫志方;組織塊法體外培養(yǎng)人胚胎神經(jīng)干細胞[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2002年06期

10 鄭學(xué)勝,朱曉峰;抗體封閉膜受體方法在神經(jīng)干細胞研究中的應(yīng)用[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2002年05期

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1 陳新生;尹國才;鄭愛芳;羅斌;王志高;謝翎;吳甘霖;;血性腦脊液對人胎腦神經(jīng)干細胞影響的體外研究[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 孫一睿;胡錦;王爾松;奚才華;姚海軍;;單層黏附培養(yǎng)技術(shù)在哺乳動物神經(jīng)干細胞體外穩(wěn)定增殖和多向分化中的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

3 李力;萬琪;劉永紅;張巍;;小鼠神經(jīng)干細胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對其增殖、分化的影響[A];科技、工程與經(jīng)濟社會協(xié)調(diào)發(fā)展——中國科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

4 田東萍;蘇敏;吳賢英;張舸;;硒、B-27在神經(jīng)干細胞球存活與分化中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2005年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

5 朱慧;李曉紅;戚菁;施維;吳信華;陸玉華;鞠少卿;劉炎;;Pax3負性調(diào)控神經(jīng)干細胞分化過程中膠質(zhì)纖維酸性蛋白的表達[A];2010’全國腫瘤分子標志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

6 李革飛;李劍平;;應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測神經(jīng)干細胞表面標志物-Nestin[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

7 姚立松;劉天慶;葛丹;崔占峰;馬學(xué)虎;;海藻酸鈣微膠珠培養(yǎng)神經(jīng)干細胞[A];第一屆全國化學(xué)工程與生物化工年會論文摘要集(下)[C];2004年

8 張坤;黃慶軍;;白介素-1β對體外海馬神經(jīng)干細胞分化為5-HT能神經(jīng)元影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會精神病學(xué)分會第九次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

9 李仲榮;朱利斌;劉征吉;夏立廣;李東;陳肖鳴;;腸神經(jīng)干細胞增殖和分化特性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

10 牛豐南;陳蕾;徐運;;CART體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞為神經(jīng)干細胞[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

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1 時仲省 高思敏;移植神經(jīng)干細胞 癱瘓兔子可爬行[N];大眾衛(wèi)生報;2001年

2 王成應(yīng);能克隆的神經(jīng)干細胞被分離[N];健康報;2004年

3 孫國根;神經(jīng)干細胞并非“全能制造者”[N];中國醫(yī)藥報;2009年

4 孫國根　白毅;靈長類腦內(nèi)神經(jīng)干細胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2011年

5 北京康復(fù)中心神經(jīng)外科 黃紅云;神經(jīng)干細胞之謎[N];健康報;2008年

6 劉霞;美將成人皮膚細胞變成神經(jīng)干細胞[N];科技日報;2011年

7 ;英研究用神經(jīng)干細胞治療中風(fēng)[N];人民日報海外版;2000年

8 劉霞;美培育出能自我更新的神經(jīng)干細胞[N];科技日報;2011年

9 本報記者 仇逸;突破堅冰[N];經(jīng)濟參考報;2001年

10 ;我國科學(xué)家成功地在體外培養(yǎng)出神經(jīng)干細胞[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

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1 李巍;神經(jīng)干細胞的分化調(diào)控及BDNF基因修飾后對大鼠脊髓損傷修復(fù)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 劉福云;大鼠胎腦神經(jīng)干細胞及兒童骨髓間質(zhì)干細胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細胞及其鑒定[D];四川大學(xué);2004年

3 高國一;胎鼠腦神經(jīng)干細胞鑒定純化與生物學(xué)特性觀察[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

4 劉飆;激活素和bFGF對神經(jīng)干細胞向神經(jīng)細胞定向分化誘導(dǎo)作用的研究[D];吉林大學(xué);2007年

5 李立君;慢病毒介導(dǎo)NT-3基因轉(zhuǎn)導(dǎo)神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)生物學(xué)特性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

6 孫念峰;大鼠GDNF及EDNRB基因共重組腺病毒的構(gòu)建及在神經(jīng)干細胞中的共表達[D];華中科技大學(xué);2007年

7 張翠萍;低氧對神經(jīng)干細胞增殖和分化的影響及HIF-1的作用機制[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

8 張麗;NF-κB信號傳導(dǎo)通路和自噬在神經(jīng)干細胞分化中的作用[D];蘇州大學(xué);2008年

9 趙舒武;缺氧對神經(jīng)干細胞的損傷及EPO、葡萄糖對其保護作用的實驗研究[D];山東大學(xué);2006年

10 馬東初;CD226分子表達于造血干/祖細胞和巨核細胞譜系及神經(jīng)細胞譜系參與巨核細胞倍體化調(diào)控[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

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1 馮年花;人誘導(dǎo)性多能干細胞向神經(jīng)干細胞分化的實驗研究[D];南昌大學(xué);2010年

2 宋精梅;比較新生大鼠腦部不同部位的神經(jīng)干細胞被誘導(dǎo)分化為少突膠質(zhì)細胞的差異[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 李政;內(nèi)皮祖細胞調(diào)控神經(jīng)干細胞分化及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 劉朋;海藻酸鈣/明膠微膠珠的制備及在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)中的應(yīng)用[D];大連理工大學(xué);2011年

5 郭兵;大鼠羊膜上皮細胞體外向類神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)分化及其移植后對視神經(jīng)再生的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 王培福;大鼠神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)和鑒定[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2002年

7 戚艷麗;神經(jīng)干細胞三維培養(yǎng)及構(gòu)建類神經(jīng)組織的研究[D];大連理工大學(xué);2010年

8 宋琴;C17.2神經(jīng)干細胞的質(zhì)膜蛋白質(zhì)組及其糖基化修飾研究[D];湖南師范大學(xué);2010年

9 周細中;人胚胎神經(jīng)干細胞的形態(tài)學(xué)觀察[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

10 王晶晶;四種miRNA在神經(jīng)干細胞與運動神經(jīng)元以及神經(jīng)干細胞分化過程中的表達研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：2365196