【摘要】：膜聯(lián)蛋白A2是一種參與調(diào)節(jié)多種病毒增殖的重要宿主蛋白。本研究通過構建過表達膜聯(lián)蛋白A2的BHKAnxa2細胞系及瞬時敲低膜聯(lián)蛋白A2,探討膜聯(lián)蛋白A2對腦心肌炎病毒在BHK-21細胞中增殖的影響。通過RT-PCR從BHK-21細胞中擴增膜聯(lián)蛋白A2全長cDNA,測序正確后克隆入pcDNA3.1整合表達載體中;用重組載體pcDNA3.1-Anxa2轉染BHK-21細胞,經(jīng)G418篩選獲得抗性克隆,qRT-PCR和Western blot試驗證明BHKAnxa2過表達膜聯(lián)蛋白A2;EMCV感染試驗證明BHK-Anxa2細胞中病毒滴度高于對照組。通過siRNA降低BHK-21細胞中膜聯(lián)蛋白A2表達,EMCV感染試驗證明膜聯(lián)蛋白A2表達下降后EMCV增殖也隨之下降。以上試驗結果表明鼠膜聯(lián)蛋白A2表達改變可導致病毒在BHK-21細胞中的增殖發(fā)生變化,提示膜聯(lián)蛋白A2與EMCV在BHK-21細胞中的增殖相關。
[Abstract]:Annexin A2 is an important host protein involved in regulating the proliferation of many viruses. The aim of this study was to investigate the effect of BHKAnxa2 cell line and transient knockout A2 on the proliferation of encephalitis virus in BHK-21 cells. The full length cDNA, of annexin A2 was amplified by RT-PCR from BHK-21 cells and cloned into pcDNA3.1 integrative expression vector. The recombinant vector pcDNA3.1-Anxa2 was used to transfect BHK-21 cells, and the resistant clones were obtained by G418 screening. QRT-PCR and Western blot tests showed that the viral titer of BHK-Anxa2 cells was higher than that of the control group. The results of qRT-PCR and Western blot showed that the viral titer of BHK-Anxa2 cells was higher than that of the control group. The expression of annexin A2 in BHK-21 cells was decreased by siRNA, and the EMCV proliferation was also decreased after the decrease of EMCV expression by EMCV infection assay. These results suggest that the expression of rat integrin A2 may lead to the proliferation of the virus in BHK-21 cells, suggesting that there is a correlation between the proliferation of EMCV and the proliferation of integrin A2 in BHK-21 cells.
【作者單位】： 甘肅省動物細胞工程技術研究中心;西北民族大學生命科學與工程學院;西北民族大學生物工程與技術國家民委重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(項目號:31460665),題目:腦心肌炎病毒受體的篩選、鑒定及功能分析 教育部“長江學者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃”(項目號:IRT13091) 中央高�；究蒲袠I(yè)務費專項資金(項目號:31920150025),題目:膜聯(lián)蛋白 A2調(diào)節(jié)腦心肌炎病毒感染的作用和機制研究。
【分類號】：R373

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 錢學磊;韓志穎;劉瑞齊;于昌龍;閆海芳;李玉花;;膜聯(lián)蛋白:植物生長過程中的多功能復合物[J];廣西植物;2013年05期

2 孫建新,陳哲宇,由振東,吳祥甫;生物素化膜聯(lián)蛋白V的構建及在細胞凋亡研究中的應用[J];生物化學與生物物理學報;1999年02期

3 郭瀛軍,吳丹,顏宏利,孫樹漢;囊尾蚴膜聯(lián)蛋白32在大腸桿菌中的表達及純化[J];生物工程學報;2001年05期

4 王小杰;李欣;武彥秋;李曉通;柳嬌嬌;張波;;膜聯(lián)蛋白A5的結構與功能研究進展[J];承德醫(yī)學院學報;2010年04期

5 何美敬;穆國俊;侯名語;陳煥英;崔順立;楊鑫雷;劉立峰;;植物膜聯(lián)蛋白的結構及功能研究進展[J];西北植物學報;2013年12期

6 蔡炯;李方;牛娜;王世真;;鈣滴定法測定~(99m)Tc定點標記膜聯(lián)蛋白V的親和力[J];基礎醫(yī)學與臨床;2010年05期

7 孫建新,沈小川,吳祥甫;膜聯(lián)蛋白V cDNA的克隆及其在大腸桿菌中的表達[J];生物化學與生物物理學報;1999年02期

8 張鑫蕊;井健;;人胎盤膜聯(lián)蛋白V cDNA的克隆及檢測[J];北京師范大學學報(自然科學版);2007年04期

9 谷昭艷;劉瑜;李春霖;;膜聯(lián)蛋白1(ANXA1)功能的研究進展[J];軍醫(yī)進修學院學報;2012年04期

10 王關林,楊懷義,夏然,方宏筠,景士西;草莓果實膜聯(lián)蛋白基因(annfaf)全長cDNA克隆及序列分析(英文)[J];植物學報;2001年08期

相關會議論文 前3條

1 王凱慧;李卡;郭瀛軍;孫樹漢;;絳蟲膜聯(lián)蛋白家族分子結構特點、功能與進化的分析[A];中國遺傳學會七屆一次青年研討會暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學術研討會論文匯編[C];2005年

2 王玉招;丁飛翔;顏宏利;薛賡;梅倩;孫樹漢;;膜聯(lián)蛋白B1表達載體及純化體系的建立[A];中國生物工程學會2006年學術年會暨全國生物反應器學術研討會論文摘要集[C];2006年

3 鞏子英;鄒華松;;苜蓿膜聯(lián)蛋白Ann7基因的表達及其功能[A];2007中國植物生理學會全國學術會議論文摘要匯編[C];2007年

相關博士學位論文 前5條

1 王凱慧;膜聯(lián)蛋白家族新成員的結構，，功能和進化[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

2 高遠艦;膜聯(lián)蛋白B1的功能研究及其在蛋白分離和純化中的應用[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

3 顏宏利;一個新的膜聯(lián)蛋白亞家族—AnxB1的鑒定及其抗凝血功能的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2002年

4 楚璞;蓮膜聯(lián)蛋白的鑒定及其在種子耐熱性和活力中的功能研究[D];中山大學;2011年

5 張毅;膜聯(lián)蛋白家族新成員的克隆及其結構與功能的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2004年

相關碩士學位論文 前4條

1 王娜;膜聯(lián)蛋白B2的結構與功能研究[D];第二軍醫(yī)大學;2009年

2 侯伶俐;苦蕎膜聯(lián)蛋白基因FtANX1的克隆及其對環(huán)境脅迫的響應研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

3 黃晶晶;膜聯(lián)蛋白B1的表達純化與抗炎功能及細胞內(nèi)定位研究[D];第二軍醫(yī)大學;2006年

4 雷楊;擬南芥膜聯(lián)蛋白基因ANN8負調(diào)控RPW8.1介導的細胞死亡和抗病性[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2014年

本文編號：2359532