【摘要】：鈣網(wǎng)蛋白（calreticulin，CRT）是一種主要存在于真核細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的Ca~(2+)結(jié)合蛋白，對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)穩(wěn)態(tài)起主要作用[1,2]。CRT分子由三個(gè)結(jié)構(gòu)域（N domain、P domain、C domain）和C末端駐留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的四個(gè)氨基酸序列KEDL組成[1,2]。鈣網(wǎng)蛋白凝集素樣球狀N domain（氨基酸序列：18-197）后面連著富含脯氨酸的Pdomain（氨基酸序列：198-308）和結(jié)合Ca~(2+)的C domain[1,3-5]。與熱休克蛋白相似，鈣網(wǎng)蛋白也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的分子伴侶蛋白，協(xié)助內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)蛋白的加工和MHCⅠ分子的正確折疊[2,5,6]。 雖然鈣網(wǎng)蛋白主要存在于細(xì)胞內(nèi)，但也可以出現(xiàn)在各種類型的細(xì)胞表面，并在細(xì)胞和細(xì)胞之間、細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)之間發(fā)揮作用[6-8]。鈣網(wǎng)蛋白還可出現(xiàn)在各種類型的免疫細(xì)胞膜表面，包括單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞和DC細(xì)胞，從而在誘導(dǎo)細(xì)胞成熟，清除凋亡細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮重要作用[9-12]。暴露在腫瘤細(xì)胞和凋亡細(xì)胞膜表面的鈣網(wǎng)蛋白可以增加這些細(xì)胞的免疫原性，使得這些細(xì)胞更容易被識(shí)別并被更有效地吞噬[13-16]。然而，這一現(xiàn)象的分子機(jī)制不是完全清楚。我們推斷鈣網(wǎng)蛋白主要是由N domain而不是C domain發(fā)揮免疫生物學(xué)功能。因?yàn)榍罢呔哂心貥庸δ懿⑶夷芨咝вH和各種糖基化蛋白質(zhì)分子[3-5]。 為了探究鈣網(wǎng)蛋白免疫生物學(xué)功能的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域，我們?cè)吮磉_(dá)了鼠源鈣網(wǎng)蛋白相關(guān)片段，，包括rCRT/N domain、rCRT/120-250、rCRT/120-308、rCRT/251-360、rCRT/C domain。其中rCRT/N domain、rCRT/120-250、rCRT/120-308是用His6作為標(biāo)簽純化得到的（rCRT/N domain主要分布在包涵體中，故從包涵體中純化）。rCRT/251-360和rCRT/C domain用GST作為標(biāo)簽純化。在純化過程中，我們發(fā)現(xiàn)rCRT/N domain蛋白濃度較低。rCRT/251-360和rCRT/C domain蛋白純度差，極容易降解。 Native-PAGE分析顯示rCRT/N domain、rCRT/251-360和rCRT/C domain均無法形成二聚體和多聚體結(jié)構(gòu)。rCRT/120-250和rCRT/120-308均可以刺激C57BL/6小鼠脾細(xì)胞增殖并分泌細(xì)胞因子IL-6。rCRT/120-250和rCRT/120-308還可刺激C57BL/6小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO和細(xì)胞因子TNFα且刺激強(qiáng)度與full-lengthCRT（FL-CRT）和rCRT/39-272相當(dāng)。重組片段蛋白免疫BALB/c小鼠，血清動(dòng)力學(xué)分析顯示rCRT/120-250和rCRT/120-308相對(duì)于其他重組蛋白可更好地產(chǎn)生高滴度的特異性抗體。 綜上所述，rCRT/120-250是FL-CRT發(fā)揮免疫生物學(xué)功能的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。rCRT/120-250免疫生物學(xué)功能以及免疫原性可能與其形成二聚體及多聚體結(jié)構(gòu)有關(guān)。
[Abstract]:Calmodulin (calreticulin,CRT) is a Ca~ (2) binding protein mainly present in the endoplasmic reticulum of eukaryotic cells, which plays a major role in maintaining the homeostasis of intracellular Ca~ (2). CRT molecules consist of three domains (N domain,P domain,). Four amino acid sequence KEDL at the end of C domain) and C terminal in endoplasmic reticulum (ER) consist of [1]. Calcium reticulin-like globular N domain (amino acid sequence: 18-197) followed by proline rich Pdomain (amino acid sequence: 198-308) and Ca~ (2) binding C domain [1: 3-5]. Similar to heat shock proteins, calmodulin is also a molecular chaperone in the endoplasmic reticulum, which facilitates the processing of endoplasmic reticulum proteins and the correct folding of MHC 鈪

本文編號(hào)：2345667