【摘要】：目的詳細(xì)了解并比較不同胎齡小鼠全腦和大腦皮層組織中神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)所占比例,為后期優(yōu)化分離培養(yǎng)NSCs提供直接量化數(shù)據(jù)。方法分離不同胎齡小鼠全腦(胎齡12.5、14、16和18d)和大腦皮層(胎齡14、16和18 d)組織,消化成單細(xì)胞懸液,貼壁培養(yǎng)3~4 h,細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記NSCs特異性標(biāo)記物Nestin,統(tǒng)計(jì)分析各組中NSCs所占比例。另外,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)Nestin mRNA在不同胎齡(12.5、14、16和18 d)小鼠大腦皮層中的表達(dá)水平。結(jié)果細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示,分離培養(yǎng)的不同胎齡小鼠全腦和大腦皮層組織中均有Nestin陽(yáng)性細(xì)胞。在分離培養(yǎng)的小鼠全腦組織中胎齡12.5 d組NSCs所占比例最高,為53.42%±1.57%;胎齡18 d組NSCs所占比例最低,為25.96%±1.31%,而胎齡14 d組和16 d組位于二者之間。在分離培養(yǎng)的不同胎齡小鼠大腦皮層組織中,胎齡14 d組NSCs所占比例最高,為33.65%±0.29%;胎齡18d組比例最低,為25.29%±0.28%,胎齡16 d組位于二者之間(26.82%±0.30%)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,當(dāng)把胎齡12.5 d組的小鼠大腦皮層組織中Nestin mRNA表達(dá)水平設(shè)定為1,胎齡14 d組的小鼠大腦皮層組織中Nestin mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.83±0.04,胎齡16 d組為0.77±0.05,胎齡18 d組為0.44±0.05。因此,隨著小鼠胎齡增加,小鼠大腦皮層中的Nestin mRNA的表達(dá)水平逐漸下降。結(jié)論在小鼠大腦發(fā)育過(guò)程中,隨著胎齡增加,分離培養(yǎng)的小鼠全腦和大腦皮層組織中神經(jīng)干細(xì)胞比例逐漸降低。
[Abstract]:Objective to investigate and compare the proportion of neural stem cells (neural stem cells,NSCs) in the whole brain and cerebral cortex of mice of different gestational ages in order to provide direct quantitative data for optimizing isolation and culture of NSCs in later stage. Methods the whole brain and cerebral cortex of mice of different gestational ages were isolated and digested into single cell suspension for 3 hours. The specific NSCs marker Nestin, was labeled with cellular immunofluorescence. The proportion of NSCs in each group was analyzed statistically. In addition, real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of Nestin mRNA in the cerebral cortex of mice at different gestational ages (12.5U 1416d and 18d). Results the results of cellular immunofluorescence showed that there were Nestin positive cells in the whole brain and cerebral cortex of mice of different gestational ages. In the whole brain of the isolated and cultured mice, the proportion of NSCs was the highest (53.42% 鹵1.57) in the 12.5-day gestational age group. The proportion of NSCs in 18 d gestational age group was the lowest (25.96% 鹵1.31), while the gestational age 14 d group and 16 d group were between them. The proportion of NSCs in the 14 d gestational age group was the highest (33.65% 鹵0.29) in the cerebral cortex of mice of different gestational ages. The lowest proportion was 25.29% 鹵0.28 in 18 d gestational age group, and 26.82% 鹵0.30% in 16 d gestational age group. The results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that the relative expression of Nestin mRNA was 0.83 鹵0.04 in the cerebral cortex of mice at gestational age of 14 days, when the expression level of Nestin mRNA was set to 1 in the cerebral cortex of the 125th day gestational age group, and the relative expression level of Nestin mRNA in the cerebral cortex was 0.83 鹵0.04 in the 14-day gestational age group. The gestational age was 0.77 鹵0.05 in 16 d group and 0.44 鹵0.05 in 18 d gestational age group. Therefore, with the increase of gestational age, the expression of Nestin mRNA in cerebral cortex of mice decreased gradually. Conclusion during the development of mouse brain, the proportion of neural stem cells in the whole brain and cerebral cortex of the isolated and cultured mice gradually decreased with the increase of gestational age.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)分子臨床醫(yī)學(xué)研究院云南省干細(xì)胞和再生醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院;南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院神經(jīng)外科廣東神經(jīng)外科研究所廣東省腦功能修復(fù)與再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;昆明醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;澳大利亞莫納什大學(xué)免疫與干細(xì)胞研究中心;
【基金】：云南省高端人才引進(jìn)計(jì)劃(編號(hào):20080A004) 云南省干細(xì)胞和再生醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(編號(hào):2015DG027)
【分類號(hào)】：R-33

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本文編號(hào)：2341394