【摘要】：背景 隨著新治療技術(shù)如骨髓移植、器官移植和強(qiáng)化治療的開展及廣譜抗生素和免疫抑制藥物的廣泛應(yīng)用,臨床上發(fā)生念珠菌感染的現(xiàn)象越來越普遍,而抗真菌藥物由于其毒副作用和易產(chǎn)生耐藥的局限性,使得白念珠菌在免疫低下患者中的發(fā)病率依然居高不下。由此,為了探索免疫低下患者中預(yù)防白念珠菌感染的措施,有必要建立適當(dāng)?shù)拿庖咭种坪笙到y(tǒng)感染念珠菌的動物模型,來模擬免疫功能低下患者的情況。我們同時也研究了重組念珠菌天冬氨酰蛋白酶(screted aspartyl proteinase, Sap)預(yù)防接種對免疫功能低下時系統(tǒng)感染念珠菌的保護(hù)作用。 第一部分 目的 建立免疫抑制小鼠系統(tǒng)感染白念珠菌模型,并觀察其主要影響因素。 方法 1)以環(huán)磷酰胺(CTX)100mg/kg和200mg/kg兩個劑量水平分別對6周齡BALB/c小鼠進(jìn)行單次腹腔注射(各3組),48h后各對應(yīng)組分別經(jīng)尾靜脈注射1×105、106、107/ml的白念珠菌,通過各組的死亡率來確定半數(shù)致死量。2)以50、100mg/kgCTX單次腹腔注射,觀察外周血中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計數(shù)被抑制的程度。3)分別采用4和8周齡小鼠來觀察周齡對死亡率的影響。4)通過組織病理檢查和腎組織真菌培養(yǎng)來驗(yàn)證模型。 結(jié)果 1)100mg/kgCTX+1×105/ml白念珠菌作用后,小鼠的死亡率接近50%。2)100mg/kgCTX單次腹腔注射后,外周血中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計數(shù)下降超過30%。3)4周齡小鼠對模型建立條件的耐受性較差,死亡率高。4)組織病理檢查和腎組織真菌培養(yǎng)結(jié)果表明模型小鼠腎臟中有菌絲生長或局灶性膿腫形成。 結(jié)論 1)成功建立了免疫抑制后系統(tǒng)感染白念珠菌的小鼠模型。2)模型建立條件下,白念珠菌對小鼠腎組織有高親嗜性。 第二部分 目的 觀察重組Sap2蛋白免疫接種3次(間隔1周)對模型小鼠抗白念珠菌系統(tǒng)感染的保護(hù)作用。 方法 6周齡BALB/c小鼠隨機(jī)分成3組：1)間隔1周,重組Sap2+弗氏完全佐劑(CFA)脛前肌注射3次,第3次免疫后1周時,按體重單次腹腔注射100mg/kgCTX,48h后經(jīng)尾靜脈注射1×105/ml的白念珠菌,劑量為0.01ml/g。2)間隔1周,CFA脛前肌注射3次,其余干預(yù)同第1組。3)間隔1周,PBS脛前肌注射3次,其余干預(yù)同第1組。分別以這3種分組方式飼養(yǎng)小鼠,并在不同時間點(diǎn)檢測下列指標(biāo),探討模型小鼠的免疫功能動態(tài)變化：1)白念珠菌感染后21天內(nèi)各組小鼠的死亡率。2)間接ELISA法測定各組小鼠血清特異性IgG抗體水平。3)ELISA法測定小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量。4)流式細(xì)胞儀分析小鼠脾淋巴細(xì)胞中的CD4+/CD8+T細(xì)胞比例。5)測定各組小鼠腎臟中的荷菌量。6)比較各組小鼠脾臟重量。7)對各組小鼠的腎、肝、肺組織進(jìn)行組織病理檢查。 結(jié)果 1)免疫組小鼠的死亡率顯著低于對照組。2)免疫組小鼠血清中的特異性IgG抗體水平的顯著高于對照組。3)念珠菌攻擊后的第1、4、7天期間,IL-2、IL-4、IFN-γ知TNF-α在第4天時的測量值高于第1和第7天水平。其中TNF-α的測量值始終低于正常對照水平。4)念珠菌攻擊后的第1、4、7天期間,各組小鼠的CD4+/CD8+比值呈現(xiàn)相似的變化,其中第4天時的測量值低于第1和第7天水平。5)免疫組小鼠的腎臟荷菌量顯著低于對照組。6)免疫組小鼠的脾臟重量顯著高于對照組。7)免疫組小鼠腎組織中檢出菌絲和局灶性膿腫的發(fā)生率低于對照組。 結(jié)論： 1)重組Sap2蛋白間隔1周免疫接種3次對模型小鼠抗白念珠菌系統(tǒng)感染具有一定的保護(hù)作用。 2)重組Sap2蛋白間隔1周免疫接種3次后會導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)脾大。
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【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2337235