【摘要】：目的： 1.比較人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSC)和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSC)中的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)及內(nèi)皮細(xì)胞(EC)的比例。 2.探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)對(duì)MSC中的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)及內(nèi)皮細(xì)胞(EC)比例的影響。 方法： 1.UC-MSC的分離培養(yǎng)：無菌條件下將新鮮臍帶剪至1-2mm,利用植塊法分離出貼壁細(xì)胞,置于37℃、5%O2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),約1周后貼壁細(xì)胞鋪滿80%瓶底,用0.25%胰蛋白酶消化后,以5×104個(gè)/cm2細(xì)胞密度傳代培養(yǎng)。 2.BM-MSC的分離培養(yǎng)：取成人骨髓3m1,使用淋巴細(xì)胞分離液采用密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞,置于5%CO2、37℃條件下培養(yǎng),約2周后貼壁細(xì)胞鋪滿80%瓶底,用0.25%胰蛋白酶消化后,以5×104個(gè)/cm2細(xì)胞密度傳代培養(yǎng)。 3.實(shí)驗(yàn)分組：將細(xì)胞分為兩組：對(duì)照組不加VEGF；實(shí)驗(yàn)組加VEGF,濃度為1Ong/ml o 4.取第5代穩(wěn)定生長(zhǎng)的細(xì)胞用流式細(xì)胞儀進(jìn)行免疫表型鑒定,檢測(cè)EC標(biāo)志CD34+CD133+和vWF+CD31+雙陽性細(xì)胞的比例。 5.瑞氏染色法觀察加入VEGF后細(xì)胞形態(tài)的變化。 6.利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞表面標(biāo)志CD34.CD133.CD31、vWF的表達(dá)情況。 7.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法觀察VEGF對(duì)EC標(biāo)志性基因表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.原代培養(yǎng)7-8天后顯微鏡下可見貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,成纖維狀,15天時(shí)細(xì)胞可融合至80%,變?yōu)樾螒B(tài)均一的紡錘形。傳代2～3次后能獲得形態(tài)均一的細(xì)胞,排列呈放射狀或旋渦狀。 2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：BM-MSC和UC-MSC中各存在少量EC及內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC),經(jīng)VEGF作用后,EC比例上升而EPC比例下降。 3.瑞氏染色顯示加入VEGF后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,MSC的長(zhǎng)寬比變大。 4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明,加入VEGF后EC相關(guān)標(biāo)志基因Tie-2和ecNOS等的表達(dá)均上調(diào),其中UC-MSC對(duì)VEGF的反應(yīng)更明顯。 結(jié)論： 1.BM-MSC和UC-MSC中存在少量的EC及EPC。 2.加入VEGF可以提高M(jìn)SC中EC的比例和細(xì)胞功能。
[Abstract]:Objective: 1. To compare the ratio of endothelial progenitor cells (EPC) and endothelial cells (EC) in human bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) and umbilical cord mesenchymal stem cells (UC-MSC). 2. To investigate the effect of vascular endothelial growth factor (VEGF) on the ratio of endothelial progenitor cell (EPC) and endothelial cell (EC) (EC) in MSC. Methods: 1.UC-MSC culture: the fresh umbilical cord was cut to 1-2mm in aseptic condition, adherent cells were isolated by grafting method and cultured in 5%O2 incubator at 37 鈩，

本文編號(hào)：2336070