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AalDV-3介導的miRNA海綿載體構建及其在埃及伊蚊體內外的抑制效果測試

發(fā)布時間:2018-11-12 07:17
【摘要】:miRNA不僅廣泛參與了蚊生長、發(fā)育的調控,還參與了媒介與病原體的相互作用,因此miRNAs可能作為蚊蟲防制與蚊媒病原體控制的靶點,但目前尚無有效的轉導系統(tǒng)。為研究白紋伊蚊濃核病毒-3(AalDV-3)是否可以作為有效的載體,我們利用內含子內表達miRNA海綿的策略,以埃及伊蚊內源性miR-210為靶基因,構建了重組病毒AalDV-anti-210。使用跨內含子引物通過RT-PCR驗證了內含子可在蚊體內外的剪接效果,通過qPCR方法對埃及伊蚊Aag2細胞與埃及伊蚊幼蟲的感染后的miR-210的表達水平進行檢測。結果證實,含有miRNA海綿的內含子可以有效的蚊體內外剪接,重組病毒可以在蚊體內外高效的抑制靶miR-210的表達水平。該結果為探索AalDV-3在蚊蟲基因功能研究及生物殺蟲劑方面的潛在價值提供了理論依據。
[Abstract]:MiRNA is not only involved in the regulation of mosquito growth and development, but also in the interaction between vector and pathogen. Therefore, miRNAs may be the target of mosquito control and mosquito pathogen control, but there is no effective transduction system. In order to study whether Aedes albopictus concentrated nuclear virus (AalDV-3) can be used as an effective vector, we constructed the recombinant virus AalDV-anti-210. by using intron expression of miRNA sponge and targeting the endogenous miR-210 gene of Aedes aegypti. The splicing effect of intron in vivo and in vitro was verified by RT-PCR using transintron primer. The expression of miR-210 in Aag2 cells of Aedes aegypti and Aedes aegypti larvae after infection was detected by qPCR method. The results showed that the intron containing miRNA sponge could effectively splice the mosquito in vivo and in vitro, and the recombinant virus could effectively inhibit the expression of target miR-210 in vivo and in vitro. The results provide a theoretical basis for exploring the potential value of AalDV-3 in the study of mosquito gene function and biological insecticides.
【作者單位】: 曲阜師范大學醫(yī)院防疫科;中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所;
【分類號】:R373

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本文編號:2326439

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