【摘要】：第一部分microRNA-4661通過拮抗RNA結(jié)合蛋白TTP對IL-10表達進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的研究 一般來說, miRNA可以通過抑制靶基因翻譯或者誘導(dǎo)靶基因mRNA降解從而對基因進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,但miRNA對基因調(diào)節(jié)的新機制仍受到很多關(guān)注。越來越多的miRNA隨著深度測序技術(shù)的發(fā)展而被發(fā)現(xiàn),而這些miRNA的生物學(xué)功能尚待揭示。miR-4661是一個在胚胎干細胞中被發(fā)現(xiàn)的miRNA,到目前為止,其功能仍不清楚。在此項研究中,我們報道了miR-4661能夠上調(diào)TLR配體刺激后的巨噬細胞中IL-10的mRNA水平和蛋白水平。此外,我們的實驗結(jié)果顯示miR-4661能夠競爭性地結(jié)合IL-103’非翻譯區(qū)(3'UTR)中的AU富含區(qū)(ARE),而這些ARE是RNA結(jié)合蛋白特征性的結(jié)合區(qū)域。TTP是一個為人熟知的RNA結(jié)合蛋白,它能夠介導(dǎo)IL-10mRNA的快速降解。而miRNA誘導(dǎo)的mRNA降解被認為是較弱的和慢速的,因此miR-4661與IL-103’UTR結(jié)合后的凈作用就是妨礙TTP介導(dǎo)的IL-10 mRNA降解,從而延長IL-10的半衰期,上調(diào)了IL-10的表達。因此,與RNA結(jié)合蛋白競爭性地與同一個靶基因mRNA結(jié)合而穩(wěn)定靶基因mRNA,這是一種miRNA的調(diào)節(jié)作用的可能機制。同時,我們的研究也揭示了IL-10表達調(diào)節(jié)的一種新機制。 第二部分miR-29通過靶向抑制IFN-γ表達而調(diào)控胞內(nèi)菌感染免疫應(yīng)答的研究 miRNA是諸多生命過程中重要的調(diào)節(jié)因子,調(diào)控了多個生物學(xué)系統(tǒng),包括哺乳動物的免疫系統(tǒng)。在天然免疫或者獲得性免疫細胞中miRNA具有特異的表達譜,它們對免疫細胞的發(fā)育、分化和功能起了至關(guān)重要的調(diào)控作用。對于T細胞來說,盡管絕大多數(shù)的miRNA在T細胞中表達,但是不同亞型或者不同發(fā)育階段的T細胞,其表達譜不盡相同,這表明miRNA獨一無二的表達譜可能決定了細胞亞型或其功能狀態(tài)。此外,miRNA在天然免疫細胞如巨噬細胞、樹突狀細胞和NK細胞的功能調(diào)控中也有重要的作用。IFN-γ是Th1細胞標(biāo)志性的細胞因子,在抗感染免疫,尤其是抗李斯特菌和結(jié)核桿菌相關(guān)的天然免疫和獲得性免疫中起著至關(guān)重要的作用。調(diào)控IFN-γ的機制非常復(fù)雜,網(wǎng)絡(luò)狀、多層面的調(diào)控以確保IFN-γ的適當(dāng)表達,我們發(fā)現(xiàn)miR-29a和miR-29b在分泌IFN-γ的細胞中均下調(diào)。根據(jù)實驗結(jié)果以及預(yù)測結(jié)果顯示IFN-γ可能是miR-29的靶基因,我們推測T細胞活化過程中可能通過某個機制下調(diào)了miR-29,從而進一步促進IFN-γ的產(chǎn)生。我們的研究結(jié)果表明李斯特菌和結(jié)核桿菌感染后,產(chǎn)生IFN-γ的NK細胞、CD4+T細胞和CD8+T細胞中miR-29表達下調(diào),miR-29可通過直接靶向IFN-γ,的3’UTR抑制其產(chǎn)生.為了研究miR-29的體內(nèi)功能,我們制備了miR-29 sponge (GS29)轉(zhuǎn)基因小鼠,其內(nèi)源性miR-29的功能被競爭性地抑制。體內(nèi)結(jié)果證實,李斯特菌感染的GS29小鼠血清中IFN-γ含量較高,臟器中細菌殘存量較少；而結(jié)核桿菌感染的GS29小鼠有較強的Th1反應(yīng),表現(xiàn)為遲發(fā)型過敏反應(yīng)較強。所以我們得出以下結(jié)論：miR-29通過直接靶向和抑制IFN-γ表達而控制胞內(nèi)菌感染。
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【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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本文編號：2326037