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Nrf2重組慢病毒對C2C12細胞增殖、凋亡和分化的影響

發(fā)布時間:2018-11-11 12:30
【摘要】:目的:研究Nrf2對C2C12細胞向成骨細胞分化過程增殖、凋亡和分化的影響。方法:分別構(gòu)建和包裝Nrf2(nuclear factor erythroid 2 p45 related factor 2)過表達及靶向Nrf2和活性轉(zhuǎn)錄因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的siRNA重組慢病毒顆粒;在骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)誘導(dǎo)下,設(shè)立不同病毒感染組處理C2C12細胞,檢測各處理組C2C12細胞的增殖、凋亡及成骨相關(guān)標(biāo)志基因的表達。結(jié)果:FCM結(jié)果顯示,BMP2+Lv-Nrf2組細胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP組(P0.05),BMP2+Lv-si Nrf2組細胞凋亡率高于BMP2+Lv-GFP組(P0.05),BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4組細胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP組(P0.05)并同時低于BMP2+Lv-siATF4組(P0.05);蛋白免疫印跡檢測結(jié)果與FCM凋亡結(jié)果一致;免疫細胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示,實驗組BMP2+Lv-Nrf2組中骨鈣蛋白(osteocalcin,OCN)與堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表達增高,而BMP2+Lv-si Nrf2組中兩種蛋白表達均降低(P0.05),聯(lián)合處理組BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4中兩種蛋白表達低于對照組和BMP2+Lv-Nrf2組(P0.05)。結(jié)論:上述結(jié)果表明,在BMP2誘導(dǎo)C2C12細胞成骨分化過程中,Nrf2可抑制C2C12細胞的凋亡,促進其向成骨分化,同時,可挽回因ATF4蛋白減少而產(chǎn)生的細胞凋亡,但對C2C12細胞的骨向分化沒有影響。
[Abstract]:Aim: to study the effects of Nrf2 on the proliferation, apoptosis and differentiation of C2C12 cells. Methods: the recombinant lentivirus particles of Nrf2 (nuclear factor erythroid 2 p45 related factor 2 were constructed and packaged respectively, and the recombinant siRNA lentivirus particles targeting Nrf2 and active transcription factor 4 (activating transcription factor 4 ATF4 were constructed and packaged respectively. Under the induction of bone morphogenetic protein 2 (BMP2), different viral infection groups were established to treat C2C12 cells. The proliferation, apoptosis and expression of osteoblast related marker genes of C2C12 cells in each treatment group were detected. Results: FCM results showed that the apoptosis rate of BMP2 Lv-Nrf2 group was lower than that of BMP2 Lv-GFP group (P0.05), and that of BMP2 Lv-si Nrf2 group was higher than that of BMP2 Lv-GFP group (P0.05). The apoptosis rate of BMP2 Lv-Nrf2 Lv-siATF4 group was lower than that of BMP2 Lv-GFP group (P0.05) and at the same time lower than that of BMP2 Lv-siATF4 group (P0.05). The results of Western blotting were consistent with those of FCM apoptosis. The expression of osteocalcin (osteocalcin,OCN) and alkaline phosphatase (alkaline phosphatase,ALP) in BMP2 Lv-Nrf2 group was higher than that in BMP2 Lv-si Nrf2 group (P0.05). The expression of two proteins in BMP2 Lv-Nrf2 Lv-siATF4 of combined treatment group was lower than that of control group and BMP2 Lv-Nrf2 group (P0.05). Conclusion: in the process of osteogenic differentiation of C2C12 cells induced by BMP2, Nrf2 can inhibit the apoptosis of C2C12 cells and promote its osteogenic differentiation, at the same time, it can reverse the apoptosis caused by the decrease of ATF4 protein. However, there was no effect on bone differentiation of C2C12 cells.
【作者單位】: 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細胞生物學(xué)及遺傳學(xué)教研室發(fā)育生物學(xué)與模式動物平臺;
【基金】:國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:No.81371928;No.81171697) 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃資助項目(編號:NCET-12-1090)
【分類號】:R3416

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