發(fā)布時(shí)間：2018-11-10 22:29

【摘要】：研究目的 探討淋巴器官中的樹(shù)突狀細(xì)胞在神經(jīng)—免疫通路中的作用。 實(shí)驗(yàn)方法 1、FR順行追蹤 實(shí)驗(yàn)組:SD大鼠3只,體重260克±20克,雄性。采用SD鼠仰臥位,用手摸到SD大鼠的胸骨,在其上方沿頸部正中線剪開(kāi)約3cm的切口,暴露右側(cè)頸上神經(jīng)節(jié),用連接微量注射器的玻璃微管往頸上神經(jīng)節(jié)緩慢注射1μl?3%FR,留針15分鐘;縫合傷口,存活9天后灌注取材。? 對(duì)照組:SD大鼠2只,體重260克±20克,雄性。采用SD鼠仰臥位,用手摸到SD大鼠的胸骨,在其上方沿頸部正中線剪開(kāi)約3cm的切口,暴露右側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)(SCG),切除頸上神經(jīng)節(jié),在頸上神經(jīng)節(jié)切除處滴1μl?3%FR,縫合傷口,存活9天后灌注取材。? 2、FR標(biāo)記與細(xì)胞膜染色雙標(biāo) 選出FR標(biāo)記的頸淋巴結(jié)組織切片用0.01M PBS漂洗(5min×3次),滴加二甲基亞砜稀釋的DiOC18(3)(1:80),室溫30min,0.01M PBS漂洗(5min×3次);室溫下DAPI染核30min, 0.01M PBS漂洗(5min×3次);液體石蠟封片,在共聚焦顯微鏡下觀察。 3、FR標(biāo)記與熒光免疫組織化學(xué)雙標(biāo) 選出FR標(biāo)記的頸淋巴結(jié)組織切片用0.01M PBS漂洗(5min×3次),血清封閉30min,甩干,分別滴加0.01M PBS適當(dāng)稀釋的不同的一抗CD3(1:500),CD14(1:500),CD22(1:500),S100(1:500),NPY(1:500)和VIP(1:500),4°C過(guò)夜;第二天用0.01M PBS漂洗(5min×3次),滴加和一抗對(duì)應(yīng)的生物素化二抗IgG(1:100),37°C 30min,0.01M PBS漂洗(5min×3次);加0.01M PBS稀釋的SABC-FITC(1:100),37°C 30min,0.01M PBS漂洗(5min×4次);室溫下DAPI染核30min,0.01M PBS漂洗(5 min×3次);液體石蠟封片,在共聚焦顯微鏡下觀察。 結(jié)果 一.頸上神經(jīng)節(jié)FR順行標(biāo)記 注射FR到頸上神經(jīng)節(jié)后,在共聚焦熒光顯微鏡下觀察頸淋巴結(jié)切片,頸淋巴結(jié)中可見(jiàn)到紅色熒光標(biāo)記到的神經(jīng)終末纖維,這說(shuō)明來(lái)自頸上神經(jīng)節(jié)的交感神經(jīng)末梢被FR標(biāo)記,但標(biāo)記到的神經(jīng)纖維只位于淋巴結(jié)組織中某一些細(xì)胞核的周圍,這預(yù)示著這種被交感神經(jīng)纖維圍繞的細(xì)胞在神經(jīng)免疫通路中可能起關(guān)鍵作用。 二.FR標(biāo)記與細(xì)胞膜雙標(biāo)結(jié)果 從順行追蹤的結(jié)果已知交感神經(jīng)只圍繞淋巴結(jié)中某一些細(xì)胞分布,為了確定FR標(biāo)記的交感神經(jīng)末梢與圍繞細(xì)胞之間的位置關(guān)系,我們用DiOC18(3)標(biāo)記細(xì)胞膜,共聚焦顯微鏡觀察到標(biāo)記交感神經(jīng)末梢的紅色熒光與標(biāo)記細(xì)胞膜的綠色熒光重疊,這一結(jié)果表明交感神經(jīng)末梢位于細(xì)胞膜上。 三.FR順行標(biāo)記與熒光免疫組織化學(xué)的雙標(biāo)結(jié)果 為了確定FR標(biāo)記的交感神經(jīng)末梢是圍繞淋巴器官中哪類細(xì)胞分布,我們分別用抗T細(xì)胞(CD3)、B細(xì)胞(CD22)、巨噬細(xì)胞(CD14)和樹(shù)突狀細(xì)胞(S100)的特異性抗體去雙標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)FR標(biāo)記的交感神經(jīng)末梢圍繞的細(xì)胞不表達(dá)CD3、CD22和CD14而表達(dá)S100,這結(jié)果表明FR標(biāo)記的交感神經(jīng)末梢不支配T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞而只支配樹(shù)突狀細(xì)胞。另外,還發(fā)現(xiàn)FR標(biāo)記的交感神經(jīng)末梢有NPY和VIP的共存。 結(jié)論 1.本文首次從形態(tài)上證實(shí)交感神經(jīng)只支配淋巴器官中的樹(shù)突狀細(xì)胞,與其它淋巴細(xì)胞(如T、B、巨噬細(xì)胞)沒(méi)有直接支配關(guān)系,這一發(fā)現(xiàn)為神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)通路的研究奠定了基礎(chǔ)。 2.支配淋巴器官的交感神經(jīng)主要有NPY和VIP兩種神經(jīng)肽共存,這兩種神經(jīng)肽可能在神經(jīng)免疫調(diào)控中起關(guān)鍵作用。 3.淋巴器官中的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是神經(jīng)免疫通路中的關(guān)鍵細(xì)胞,可能是一個(gè)神經(jīng)—免疫對(duì)話器,對(duì)于它在神經(jīng)免疫調(diào)控中的作用還有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 林勇，，劉慶瑩，朱長(zhǎng)庚;白細(xì)胞介素─2（IL─2）對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;1996年03期

2 李改麗,王百忍,鞠躬;外周免疫刺激誘導(dǎo)小鼠下丘腦室旁核和視上核中Ⅰ型IL -1受體表達(dá)的變化[J];解剖學(xué)報(bào);2003年01期

3 李寧;劉冠賢;石詠軍;;樹(shù)突狀細(xì)胞與免疫調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展[J];西南軍醫(yī);2010年03期

4 郭爾娜;梁軍利;唐玉蘭;;樹(shù)突狀細(xì)胞的免疫調(diào)控與多發(fā)性硬化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年02期

5 石德光,胡森,姜小國(guó),孫丹,晉樺,黎君友,盛志勇;電刺激迷走神經(jīng)對(duì)內(nèi)毒素血癥所致急性肺損傷的影響[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2002年12期

6 石德光,胡森,姜小國(guó),孫丹,晉樺,黎君友,柳琪林,盛志勇;迷走神經(jīng)興奮對(duì)內(nèi)毒素致大鼠心臟炎癥反應(yīng)的影響[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2003年01期

本文編號(hào)：2323734