【摘要】：目的：建立大鼠同種異體腹腔心臟異位移植模型，經(jīng)頸靜脈輸注供體骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)和IL-6單克隆抗體（IL-6mAb），研究MSCs和IL-6mAb對受體CD4~+CD25~+foxp3~+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)比例、Foxp3蛋白表達率、Th17細胞比例、供心存活時間的影響。并結(jié)合體外MSCs與CD4~+T細胞在不同條件下共培養(yǎng)實驗，揭示MSCs和IL-6mAb對免疫耐受的調(diào)節(jié)機制。 方法：體外部分：采用體外MSCs與CD4~+T細胞不同比例不同條件下共培養(yǎng)，實驗分組為：A組（CD4~+T單獨培養(yǎng)組）、B1組（MSCs/CD4~+T1:1）、B2組（MSCs/CD4~+T1:10）、B3組（MSCs/CD4~+T1:100）、C組（MSCs/CD4~+T/IL-6mAb1:10）、D組(MSCs/CD4~+T/TGF-βmAb1:10)、Bt組Transwell(MSCs/CD4~+T1:10)、Ct組Transwel（lMSCs/CD4~+T/IL-6mAb1:10）、Dt組Transwell (MSCs/CD4~+T/TGF-βmAb1:10)，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀檢測CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)的比例、Foxp3蛋白的表達率變化及Th17細胞比例，ELISA方法測定上清液TGF-β1、IL-10、IL-2、IL-6、IL-17的變化。 體內(nèi)部分：供體SD大鼠和受體Wistar大鼠各20只隨機分成四組，Ⅰ組（空白組）：僅行SD大鼠到Wistar大鼠同種異位腹腔心臟移植，在心臟移植前和后不作任何處理。Ⅱ組（輸注PBS組）：受體Wistar大鼠心臟移植術(shù)前連續(xù)5天和術(shù)后連續(xù)3天經(jīng)頸靜脈輸注PBS，每天0.2ml。Ⅲ組（移植MSCs組）：受體Wistar大鼠心臟移植術(shù)前連續(xù)5天和術(shù)后連續(xù)3天經(jīng)頸靜脈輸注培養(yǎng)擴增的MSCs，每天0.2ml(MSCs1.0*10~6個/0.2ml)。Ⅳ組（移植MSCs~+輸注IL-6mAb）：受體Wistar大鼠心臟移植術(shù)前連續(xù)5天術(shù)后連續(xù)3天經(jīng)頸靜脈輸注培養(yǎng)擴增的MSCs和移植術(shù)后連續(xù)5天經(jīng)頸靜脈輸注IL-6mAb（IL-6mAb100μg/kg/天）。觀測指標：供心的存活時間、供體心臟病理改變，受體Wistar大鼠體內(nèi)CD4~+CD25~+Treg細胞比例，F(xiàn)oxp3蛋白表達率，Th17細胞比例和外周血中TGF-β1、IL-10、IL-2、IL-6、IL-17的變化。 結(jié)果：體外部分：（1）體外實驗組CD4~+CD25~+Treg細胞比例、Foxp3蛋白表達率、Th17細胞比例檢測結(jié)果：CD4~+CD25~+Treg細胞比例檢測結(jié)果，，C組和Ct組明顯高于其他各組（P＜0.05），且C組明顯高于Ct組（P＜0.05）；Foxp3蛋白表達檢測結(jié)果，C組和Ct組明顯高于其他各組（P＜0.05），且C組明顯高于Ct組（P＜0.05）；Th17細胞比例檢測結(jié)果，C組和Ct組明顯低于其他各組（P＜0.05），且C組明顯低于Ct組（P＜0.05）。（2）體外實驗組TGF-β1檢測結(jié)果： C組上清液中TGF-β1濃度較其他各組明顯升高（P＜0.05）。（3）體外實驗組IL-10檢測結(jié)果：C組和Ct相上清液中IL-10濃度較其他各組明顯升高（P＜0.05）；且C組明顯高于Ct相比較（P＜0.05）。（4）體外實驗組IL-2檢測結(jié)果：C組和Ct組上清液中IL-2濃度較其他各組明顯降低（P＜0.05），且C組明顯低于Ct組（P＜0.05）。（5）體外實驗組IL-6檢測結(jié)果： C組和Ct組上清液中IL-6濃度較其他各組明顯降低（P＜0.05），C組和Ct組之間有顯著差異（P＜0.05）。（6）體外實驗組IL-17檢測結(jié)果：C組和Ct組上清液中IL-17濃度較其他各組明顯降低（P＜0.05），C組和Ct組之間無顯著差異。 體內(nèi)部分：(1)供心平均存活時間（MST）：Ⅲ、Ⅳ組平均存活時間較Ⅰ、Ⅱ組明顯延長（P＜0.05）。Ⅳ組平均存活時間較Ⅲ組明顯延長（P＜0.05）。(2)受體外周血CD4~+CD25~+Treg細胞比例、 Foxp3蛋白表達率、 Th17細胞比例檢測結(jié)果：CD4~+CD25~+Treg細胞比例檢測結(jié)果，Ⅲ組和Ⅳ組明顯高于Ⅰ組、Ⅱ組（P＜0.05），Ⅲ組和Ⅳ組相比較，Ⅲ組明顯低于Ⅳ組（P＜0.05）；Foxp3蛋白表達率檢測結(jié)果，Ⅳ組明顯高于其他組（P＜0.05）；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相比較無統(tǒng)計學(xué)差異；Th17細胞比例檢測結(jié)果，Ⅲ、Ⅳ組明顯低于其他組（P＜0.05）；Ⅲ、Ⅳ組組間比較（P＜0.05）。（3）受體外周血TGF-β1檢測結(jié)果：Ⅳ組和Ⅲ組明顯高于Ⅰ組、Ⅱ組（P＜0.05），Ⅳ組和Ⅲ組相比較，Ⅳ組明顯高于Ⅲ組（P＜0.05）。（4）受體外周血IL-10檢測結(jié)果：Ⅳ組和Ⅲ組明顯高于Ⅰ組、Ⅱ組（P＜0.05），Ⅳ組和Ⅲ組相比較，Ⅳ組明顯高于Ⅲ組（P＜0.05）。（5）受體外周血IL-2檢測結(jié)果：Ⅳ組和Ⅲ組明顯低于Ⅰ組、Ⅱ組（P＜0.05），Ⅳ組和Ⅲ組相比較，Ⅳ組明顯低于Ⅲ組（P＜0.05）。（6）受體外周血IL-6檢測結(jié)果：Ⅳ組和Ⅲ組明顯低于Ⅰ組、Ⅱ組（P＜0.05），Ⅳ組和Ⅲ組相比較，Ⅳ組明顯低于Ⅲ組（P＜0.05）。（7）受體外周血IL-17檢測結(jié)果：Ⅳ組和Ⅲ組明顯低于Ⅰ組、Ⅱ組（P＜0.05），Ⅳ組和Ⅲ組相比較，Ⅳ組明顯低于Ⅲ組（P＜0.05）。結(jié)論：1、MSCs聯(lián)合IL-6mAb可顯著提高CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細胞的比例、降低Th17細胞比例，顯著延長同種心臟移植物的存活時間，并具有MSCs劑量依賴性。2、MSCs與CD4~+T細胞之間接觸調(diào)節(jié)機制在免疫耐受中發(fā)揮重要作用。3、MSCs通過下調(diào)IL-2、IL-17,上調(diào)IL-10、TGF-β1等免疫抑制因子的表達，從而達到免疫抑制功能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392

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本文編號：2316621