發(fā)布時(shí)間：2018-11-06 14:01

【摘要】：結(jié)核炳(Tuberculosis, TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引起的以呼吸系統(tǒng)感染為主的慢性傳染疾病。全球約有1/3的人口感染了結(jié)核,且每年的新增病例約有900萬(wàn),并約有200萬(wàn)的死亡病例。而在過(guò)去的三十年間,人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)的感染與結(jié)核病的流行越來(lái)越息息相關(guān)。全球約有1400萬(wàn)人共感染了Mtb和HIV。HIV的感染是導(dǎo)致潛伏性結(jié)核感染發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病的最重要原因,使?jié)摲越Y(jié)核20-30倍更多的可能發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核。同時(shí)Mtb也是導(dǎo)致艾滋病死亡的最重要原因之一,約占艾滋死亡人數(shù)的四分之一。在同一個(gè)宿主內(nèi),這兩種病原體,Mtb與HIV,相互間起著協(xié)同作用,可以互相促進(jìn)彼此在體內(nèi)的復(fù)制及致病性,能夠加速宿主免疫功能的衰退并導(dǎo)致宿主死亡。另外由于兩種病原體共感染的復(fù)雜性給疾病的診斷及有效治療也提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn),尤其對(duì)那些有大量共感染人群的國(guó)家如非洲及亞洲的許多國(guó)家的衛(wèi)生保健系統(tǒng)產(chǎn)生了巨大壓力。目前最經(jīng)濟(jì)有效的防控方法便是采用疫苗。然而,目前唯一批準(zhǔn)人類使用的結(jié)核疫苗卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin, BCG)并不能有效的預(yù)防成人中最常見(jiàn)形式的結(jié)核病——肺結(jié)核,并且也不能阻止Mtb的傳播。同樣地,盡管已經(jīng)有一些HIV候選疫苗正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的評(píng)估,但到目前為止仍然沒(méi)有批準(zhǔn)有效的預(yù)防性HIV疫苗。因此,研制一個(gè)有效的疫苗使其能在抗結(jié)核的同時(shí)還具有抗HIV的免疫原性是十分必要的。 機(jī)體在抗結(jié)核的過(guò)程中主要是通過(guò)T細(xì)胞免疫應(yīng)答。因此選用能夠誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答的T細(xì)胞表位是一種理想的疫苗設(shè)計(jì)方式。選擇性將多個(gè)強(qiáng)免疫原性T細(xì)胞表位應(yīng)用于一個(gè)疫苗中不僅能夠誘導(dǎo)更廣泛更強(qiáng)烈的T細(xì)胞應(yīng)答,還能避免由抗原中其他不利成分引起的不良反應(yīng)或逃逸作用。然而表位作為短肽單獨(dú)使用時(shí)免疫原性低,需要連接于載體蛋白。傳統(tǒng)的方式是將表位直接進(jìn)行串聯(lián)連接于載體蛋白,但這種方式被證明不能全面誘導(dǎo)每個(gè)表位的特異性應(yīng)答。本研究通過(guò)將表位構(gòu)鑄到載體蛋白的不同區(qū)域中以期保持各表位的強(qiáng)免疫原性。以往的研究證明天然結(jié)構(gòu)蛋白是理想的載體蛋白。p24蛋白是HIV-1的一個(gè)免疫優(yōu)勢(shì)抗原,能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈的體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答。有效的抗HIV-1免疫應(yīng)答主要就是通過(guò)體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答兩者的相輔相成作用。因此本研究通過(guò)將p24蛋白作為插入結(jié)核表位的載體蛋白,構(gòu)建得到一個(gè)同時(shí)抗Mtb/HIV-1的疫苗pP24-Mtb。通過(guò)將pP24-Mtb質(zhì)粒免疫小鼠,檢測(cè)誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答及免疫保護(hù)力,獲得了以下結(jié)果： 一、新型DNA疫苗pP24-Mtb的分子設(shè)計(jì)及構(gòu)建表達(dá) 根據(jù)網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,我們選擇從MPT64、Ag85A、Ag85B及TB10.4四個(gè)結(jié)核優(yōu)勢(shì)抗原中選擇T細(xì)胞表位,再通過(guò)表位預(yù)測(cè)軟件確定MPT6476-84、Ag85A242-250、Ag85B184-192、TB10.474-82四條功能性T細(xì)胞表位作為疫苗所要插入的結(jié)核表位。另外根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)確定以HIV-1p24優(yōu)勢(shì)抗原作為插入結(jié)核表位的載體蛋白。根據(jù)蛋白空間結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件得到p24蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu),并結(jié)合文獻(xiàn)分析確定最終的插入位置,即：在p24N端laa之前插入MPT6476-84表位；在91aa之后插入Ag85A242-250表位；在101aa之后插入Ag85B]84-192表位；在147aa之后插入TB10.474-82表位。 根據(jù)以上設(shè)計(jì)方案,構(gòu)建疫苗pcDNA3.1-P24-Mtb及各對(duì)照質(zhì)粒。首先以pET11a-P24為模板,經(jīng)PCR擴(kuò)增出p24基因片段,經(jīng)酶切定向插入到真核表達(dá)載體pcDNA3.1中,構(gòu)建得到重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-P24。為了構(gòu)建pcDNA3.1-P24-Mtb質(zhì)粒,我們?cè)O(shè)計(jì)了包含有4條結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞表位并且相互間有重疊互補(bǔ)序列的各條p24特異性引物,以pcDNA3.1-P24質(zhì)粒為模板,通過(guò)基因重疊延伸拼接PCR技術(shù)得到最終的p24-Mtb基因片段。經(jīng)過(guò)同樣的酶切步驟定向連接于pcDNA3.1中,得到pP24-Mtb DNA疫苗。通過(guò)PCR、特異性雙酶切及測(cè)序鑒定所構(gòu)建質(zhì)粒正確。為分析質(zhì)粒的體外表達(dá)情況,將p24及p24-Mtb基因片段經(jīng)雙酶切后克隆至pET32a質(zhì)粒中,經(jīng)IPTG體外誘導(dǎo)表達(dá)并經(jīng)親和層析純化柱得到純度超過(guò)80%的蛋白。純化蛋白經(jīng)Western Blot鑒定,均能和小鼠抗p24抗體結(jié)合,證明了質(zhì)粒的正確表達(dá)也說(shuō)明了其空間結(jié)構(gòu)的完整性。 二、 pP24-Mtb疫苗中結(jié)核表位的免疫反應(yīng)性研究 以往的研究發(fā)現(xiàn)疫苗中將表位直接串聯(lián)的方式并不能使每個(gè)表位都發(fā)揮作用,為了對(duì)比串聯(lián)表位方式與pP24-Mtb構(gòu)鑄表位方式的優(yōu)越性,我們構(gòu)建了表位串聯(lián)對(duì)照質(zhì)粒pP24pep,即將四個(gè)結(jié)核表位串聯(lián)后連接于p24蛋白的C末端。同樣以pP24質(zhì)粒為模板,通過(guò)基因重疊延伸拼接PCR技術(shù)得到p24pep基因片段,經(jīng)酶切連接入pcDNA3.1中。將pP24-Mtb、pP24pep及pcDNA3.1(vector)三種質(zhì)粒分別肌肉免疫BALB/c小鼠,隔周免疫,共4次。于末次免疫后2周取脾臟淋巴細(xì)胞從特異性增殖反應(yīng)、IFN-y生成細(xì)胞、CTL應(yīng)答及細(xì)胞因子的分泌水平等方面分析了各組中表位的反應(yīng)差異性。 1)首先我們檢測(cè)了淋巴細(xì)胞針對(duì)四個(gè)混合結(jié)核表位肽產(chǎn)生的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答,發(fā)現(xiàn)與vector空質(zhì)粒組相比,pP24-Mtb與pP24pep免疫后均可以產(chǎn)生較高水平的混合表位肽特異性的增殖反應(yīng)、產(chǎn)生大量的IFN-γ分泌細(xì)胞、誘導(dǎo)較強(qiáng)的CTL殺傷應(yīng)答并分泌大量的Thl型細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α),然而pP24-Mtb組與pP24pep組間并無(wú)顯著差異,提示pP24-Mtb、pP24pep免疫均可以促進(jìn)針對(duì)混合表位肽特異性的細(xì)胞免疫應(yīng)答。 2)為了進(jìn)一步探討兩質(zhì)粒對(duì)各表位免疫原性展現(xiàn)的差異性,我們?cè)隗w外用每一個(gè)單表位肽進(jìn)行刺激,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：pP24-Mtb免疫組對(duì)四個(gè)表位肽均可以產(chǎn)生特異性增殖反應(yīng),而與之相比,pP24pep免疫組僅可以產(chǎn)生Ag85A242-250和Ag85B184-192表位特異性增殖反應(yīng),而對(duì)MPT6476-84和TB10.474-82表位則沒(méi)有。另外pP24-Mtb組還可以產(chǎn)生每個(gè)表位特異性的IFN-γ分泌細(xì)胞,而pP24pep組僅能產(chǎn)生針對(duì)Ag85A242-250和Ag85B184-192表位的IFN-γ分泌細(xì)胞,而對(duì)MPT6476-84和TB10.474-82表位的應(yīng)答則遠(yuǎn)弱于pP24-Mtb組。同樣,pP24-Mtb組可以誘導(dǎo)較強(qiáng)的四個(gè)單表位特異性CTL殺傷率及Thl型細(xì)胞因子,而pP24pep組則僅對(duì)兩個(gè)表位產(chǎn)生較強(qiáng)的應(yīng)答。因此提示pP24-Mtb質(zhì)�？梢员３置總�(gè)表位的強(qiáng)免疫原性,使每個(gè)表位都能產(chǎn)生相應(yīng)的特異性免疫應(yīng)答,而pP24pep質(zhì)粒僅能保持其中兩個(gè)表位發(fā)揮作用。 3)在此基礎(chǔ)上,為了進(jìn)一步模擬天然感染狀態(tài)時(shí)兩種質(zhì)粒中表位的反應(yīng)差異性,我們采用熱滅活的BCG (HK BCG)體外刺激脾細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)pP24-Mtb免疫組可以產(chǎn)生顯著高于pP24pep免疫組的增殖反應(yīng)。另外,pP24-Mtb組經(jīng)HKBCG刺激后能夠產(chǎn)生大量的IFN-γ分泌細(xì)胞,顯著高于pP24pep組。同樣pP24-Mtb免疫組還可以誘導(dǎo)高水平的HK BCG特異性CTL殺傷率及Thl型細(xì)胞因子,遠(yuǎn)高于pP24pep免疫組。 因此通過(guò)上述研究我們發(fā)現(xiàn),將表位構(gòu)鑄到載體蛋白不同區(qū)域中的疫苗構(gòu)建方式相比傳統(tǒng)的將表位串聯(lián)的構(gòu)建方式更能維持每個(gè)表位的強(qiáng)免疫原性,從而誘生每個(gè)表位特異的免疫應(yīng)答,避免出現(xiàn)表位功能喪失的現(xiàn)象而使應(yīng)答不全面。另外表位構(gòu)鑄的方式使表位更接近于其在天然抗原中的存在形式,從而在滅活菌刺激下誘導(dǎo)更為強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答,且這種應(yīng)答更接近于機(jī)體天然感染狀態(tài)時(shí)產(chǎn)生的應(yīng)答,因此可能介導(dǎo)更為有效的保護(hù)作用。在接下來(lái)的研究工作中,我們將探討該疫苗誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答及免疫保護(hù)作用。 三、 pP24-Mtb疫苗誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答及免疫保護(hù)作用研究 分別以pP24-Mtb, pP24, pcDNA3.1(vector)肌肉免疫小鼠,隔周免疫,共4次。BCG經(jīng)皮下免疫5×105CFU,僅一次。隔周收集小鼠血清。從誘導(dǎo)的Mtb及HIV-1特異性體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答的各個(gè)方面進(jìn)行了檢測(cè)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 1)在體液免疫應(yīng)答方面,因?yàn)檫x擇的是結(jié)核T細(xì)胞表位,因此疫苗并不能產(chǎn)生結(jié)核特異性抗體,我們重點(diǎn)關(guān)注了HIV-1特異性抗體的產(chǎn)生。pP24-Mtb可以顯著提高血清p24特異性IgG抗體的滴度,第10周達(dá)到高峰,滴度達(dá)到1：4000,顯著高于同期pP24疫苗組(1：2250)。更有意義的是,pP24-Mtb免疫促進(jìn)了抗體親合力成熟,誘生了高親合力抗體的產(chǎn)生。高水平高質(zhì)量的抗體對(duì)于有效預(yù)防HIV-1感染和清除病毒極為重要。 2)在細(xì)胞免疫應(yīng)答方面,我們首先檢測(cè)了疫苗誘導(dǎo)的結(jié)核及HIV-1特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),發(fā)現(xiàn)pP24-Mtb免疫后可以產(chǎn)生高水平的結(jié)核特異性增殖反應(yīng),并且與BCG免疫組的應(yīng)答無(wú)顯著差異。同時(shí),pP24-Mtb疫苗還可以產(chǎn)生強(qiáng)烈的p24特異性增殖反應(yīng),增殖指數(shù)達(dá)到3.7。提示pP24-Mtb疫苗不僅能夠產(chǎn)生結(jié)核特異性的細(xì)胞增殖反應(yīng),還可以促進(jìn)HIV-1特異性的淋巴細(xì)胞增殖功能。 3)特異性IFN-γ分泌細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：pP24-Mtb免疫組可以產(chǎn)生大量的結(jié)核特異性IFN-γ分泌細(xì)胞,并與BCG的IFN-γ分泌細(xì)胞頻率相似。另外,與pP24組相比,pP24-Mtb免疫小鼠能夠產(chǎn)生更多的p24特異性的IFN-γ生成細(xì)胞。提示pP24-Mtb疫苗能夠促進(jìn)產(chǎn)生結(jié)核及HIV-1特異性的IFN-γ分泌細(xì)胞。我們進(jìn)一步檢測(cè)了分泌IFN-γ的淋巴細(xì)胞亞群比例,pP24-Mtb免疫后CD4+IFN-γ+T細(xì)胞與CD8+IFN-γ+T細(xì)胞比例都顯著高于vector空質(zhì)粒組,與BCG免疫組相似。另外,pP24-Mtb組同時(shí)還能促進(jìn)p24特異性CD4+/CD8+IFN-γ+T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生。結(jié)果說(shuō)明pP24-Mtb疫苗能夠促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生結(jié)核及HIV-1特異性的Th1型應(yīng)答并提示能夠產(chǎn)生CD8+CTL應(yīng)答。 4)特異性CTL活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：pP24-Mtb免疫小鼠的淋巴細(xì)胞有更高水平的結(jié)核特異性CTL殺傷率,與BCG組相似,達(dá)到50%。與此同時(shí),pP24-Mtb還能產(chǎn)生強(qiáng)烈的p24特異性CTL殺傷率,并顯著高于pP24組。進(jìn)一步證明了pP24-Mtb免疫能夠同時(shí)增強(qiáng)結(jié)核及HIV-1特異性CTL應(yīng)答。 5)特異性細(xì)胞因子的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：pP24-Mtb疫苗能夠誘導(dǎo)大量結(jié)核特異性的Thl型細(xì)胞因子的表達(dá)(IFN-γ、TNF-α),而Th2型細(xì)胞因子(IL-4、IL-10)的表達(dá)水平非常低。此外,pP24-Mtb免疫組與pP24免疫組相比,可以誘生更高水平的p24特異性Thl型細(xì)胞因子,而Th2型細(xì)胞因子的水平也非常低。進(jìn)一步證明pP24-Mtb免疫后能夠同時(shí)促進(jìn)結(jié)核及HIV-1特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答向Th1型偏移。 pP24-Mtb疫苗成功誘導(dǎo)了強(qiáng)烈的抗結(jié)核T細(xì)胞免疫應(yīng)答,并且其應(yīng)答強(qiáng)度與BCG無(wú)顯著差異,提示其誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答可以介導(dǎo)有效的保護(hù)作用。我們通過(guò)建立小鼠結(jié)核感染模型評(píng)價(jià)了該疫苗的抗結(jié)核保護(hù)效果,結(jié)果顯示： 1)與vector對(duì)照組相比,pP24-Mtb可以顯著減少小鼠肺臟及脾臟中的結(jié)核菌落數(shù),并且與BCG免疫組減少菌落數(shù)的水平相當(dāng),沒(méi)有顯著差異。提示pP24-Mtb疫苗能夠有效抑制感染的結(jié)核菌在局部及系統(tǒng)性組織中的復(fù)制,并且達(dá)到與BCG疫苗相似的水平。 2)在觀察感染部位肺臟中結(jié)核所致的病理?yè)p傷情況時(shí)發(fā)現(xiàn),在pP24和vector對(duì)照小鼠肺組織中有明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及類肉芽腫樣病變,正常的肺泡結(jié)構(gòu)被破壞,炎癥范圍分別達(dá)到60%和75%。而在pP24-Mtb和BCG免疫組,僅見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),且肺泡結(jié)構(gòu)無(wú)明顯異常,與正常對(duì)照組接近。進(jìn)一步證明pP24-Mtb疫苗能夠產(chǎn)生有效的抗結(jié)核保護(hù)效果,抵抗結(jié)核感染,并且其保護(hù)效果與BCG疫苗相似。 本研究通過(guò)將強(qiáng)免疫原性的結(jié)核T細(xì)胞表位構(gòu)鑄到HIV-1p24蛋白的不同區(qū)域中構(gòu)建得到新型DNA疫苗pP24-Mtb。觀察了其與傳統(tǒng)表位構(gòu)建方式相比的構(gòu)建合理性與優(yōu)越性,其能使每個(gè)表位都誘導(dǎo)更接近于天然感染狀態(tài)時(shí)產(chǎn)生的特異性免疫應(yīng)答。在分析誘導(dǎo)的結(jié)核及HIV-1特異性免疫應(yīng)答時(shí)確定了pP24-Mtb疫苗能夠同時(shí)誘生全面有效的抗結(jié)核及抗HIV-1免疫應(yīng)答。并且證明了該疫苗在結(jié)核感染后展現(xiàn)了有效的保護(hù)作用。本研究為抗共感染疫苗的分子設(shè)計(jì)提供了新的思路和技術(shù)平臺(tái)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392

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9 羅賢忠;黃青云;;禽大腸桿菌血清型O_2、O_(78)融合雙價(jià)弱毒菌株免疫原性的研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

10 賈曉暉;程健君;何多姣;李雙霞;田穎新;賈天軍;;感染CPn人群中CPn0308免疫原性分析研究[A];河北省免疫學(xué)會(huì)第六次免疫學(xué)大會(huì)資料匯編[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者楊健;腫瘤細(xì)胞遨游太空后發(fā)生變化[N];人民日?qǐng)?bào);2003年

2 齊繼成編譯;PowderJect的Fluvirin進(jìn)入Ⅰ期臨床[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

3 賢人;唐教授談流感疫苗[N];保健時(shí)報(bào);2003年

4 張路 王立成;我國(guó)流感疫苗的研發(fā)史[N];健康報(bào);2003年

5 本報(bào)記者 洪天語(yǔ);GLP，，困于錢財(cái)和人才[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

6 王興波;我國(guó)獸用生物制品業(yè)面臨的選擇[N];中國(guó)畜牧報(bào);2005年

7 王;乙肝疫苗成本有望減少[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 記者 李泳溈;長(zhǎng)春百克多個(gè)新藥進(jìn)入臨床研究[N];吉林日?qǐng)?bào);2009年

9 黃敏燕　譯;靜脈用Ferumoxytol可安全有效治療貧血癥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

10 廖忠東;生物制品的種類及特點(diǎn)[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 井申榮;微載體制備甲肝滅活疫苗的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

2 陳夏冰;胸膜肺炎放線桿菌保守表面蛋白的鑒定與免疫原性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 蔣爾鵬;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)降低人胚胎心臟垞細(xì)胞免疫原性的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 羅源;丙型肝炎病毒高變區(qū)1對(duì)HCV E2蛋白免疫原性抑制作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 沈美龍;基于DNA免疫的乙型肝炎病毒表面抗原大中小蛋白的免疫原性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

6 劉淑杰;大腸桿菌粘附素亞基FaeG在Lactococcus lactis中的表達(dá)及免疫原性研究[D];江南大學(xué);2010年

7 張榮光;幽門螺桿菌omp11和lpp20基因的克隆及表達(dá)產(chǎn)物免疫原性和保護(hù)效果研究[D];鄭州大學(xué);2004年

8 田美娟;天壇痘病毒載體改造及其對(duì)HIV重組疫苗免疫原性的影響[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

9 王希;新型流感病毒樣顆粒疫苗在老齡小鼠中免疫原性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 李國(guó)江;吉林地區(qū)PRRS流行病學(xué)調(diào)查及真核疫苗構(gòu)建與免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王素華;雞E.tenella 5401基因的克隆及免疫原性的研究[D];浙江大學(xué);2004年

2 甘黎明;雞大腸桿菌1型菌毛的抗原性分析及pi/A基因表達(dá)載體構(gòu)建[D];揚(yáng)州大學(xué);2005年

3 唐艷;TRP-2_（180-188）CTL表位之APL的設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 陳金武;聚乙二醇化重組人生長(zhǎng)激素的免疫原性、生物活性及藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];安徽大學(xué);2007年

5 趙潔;鴨疫里默氏桿菌自然弱毒株的部分特性研究[D];西南大學(xué);2008年

6 張莉;豬肺炎支原體MY-99株的培養(yǎng)特性、致病性及免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 原野;重組人干擾素-β1b臨床前長(zhǎng)期毒性和免疫原性的評(píng)價(jià)和研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

8 孫會(huì)來(lái);人免疫缺陷病毒重組非復(fù)制型痘苗病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2007年

9 張振華;鴨致病性腸炎沙門氏菌外膜蛋白組成及免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 臧大鵬;牛結(jié)核分支桿菌外膜蛋白OMP37、OMP12基因的克隆表達(dá)及免疫活性檢測(cè)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2314483