發(fā)布時間：2018-10-29 21:57

【摘要】：空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)是一種導致人類發(fā)生急性腸炎與食物中毒的、危害僅次于沙門氏菌和志賀氏菌的人畜共患病原菌。建立空腸彎曲菌快速的檢測方法,是有效預防和控制其疾病發(fā)生的重要手段。 通常檢測空腸彎曲菌的方法有分離培養(yǎng)方法、生化檢測、免疫學檢測、分子生物學方法等。免疫學快速篩查方法在病原微生物的檢測中具有重要的應用價值,目前在空腸彎曲菌的快速檢測方面,相關(guān)產(chǎn)品及技術(shù)甚少。 獲得針對空腸彎曲菌的特異性抗體,是建立空腸彎曲菌的免疫學快檢方法的首要前提。為此,本文開展了以下研究。 本文首先在大量文獻調(diào)研的基礎(chǔ)上,確定了空腸彎曲菌的外膜蛋白PEB1、CadF作為特征性抗原。其編碼的基因序列相對保守,且在不同的血清型空腸彎曲菌中均有表達,提示可作為檢測抗原。 采用分子生物學的技術(shù)手段,本文成功克隆表達了PEB1和CadF兩種外膜蛋白,利用鎳離子親和柱純化了表達產(chǎn)物。以PEB1和CadF兩種純化蛋白免疫新西蘭長耳兔,分別制備了相應的多克隆抗體,其效價分別為1:1024000和1：128000。 本文利用斑點雜交的方法,發(fā)現(xiàn)PEB1抗血清與綠膿假單胞菌、金黃色葡萄球菌、保加利亞乳桿菌、福氏志賀菌等存在交叉反應,CadF抗血清與普通變性桿菌、副溶血弧菌、單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌和短雙歧桿菌等存在交叉反應。為此,本文采用辛酸硫酸銨沉淀法,去除了血清中的雜蛋白。進一步采用磁珠法,消除了兩種抗血清與上述微生物的交叉反應,獲得了高純度和高特異性的抗體。 本文研究結(jié)果將為建立空腸彎曲菌的免疫學檢測方法,奠定技術(shù)基礎(chǔ)、提供實驗材料。
[Abstract]:Campylobacter jejuni (Campylobacter jejuni) is a zoonotic pathogen that causes acute enteritis and food poisoning in humans and is second only to Salmonella and Shigella. To establish a rapid detection method for Campylobacter jejuni is an important method to prevent and control the occurrence of Campylobacter jejuni. The methods for detection of Campylobacter jejuni are isolation, biochemistry, immunology, molecular biology and so on. The immunological rapid screening method has important application value in the detection of pathogenic microorganisms. At present, there are few related products and techniques in the rapid detection of Campylobacter jejuni. Obtaining specific antibodies against Campylobacter jejuni is the first prerequisite for rapid immunological detection of Campylobacter jejuni. Therefore, this paper carried out the following research. Based on a large number of literatures, the outer membrane protein (PEB1,CadF) of Campylobacter jejuni was identified as the characteristic antigen. The coding gene sequence was relatively conserved and expressed in different serotypes of Campylobacter jejuni, suggesting that it could be used as an antigen for detection of Campylobacter jejuni. Two kinds of outer membrane proteins, PEB1 and CadF, were successfully cloned and expressed by molecular biological techniques, and the expressed products were purified by nickel ion affinity column. Two purified proteins, PEB1 and CadF, were used to immunize New Zealand long-eared rabbits, and the corresponding polyclonal antibodies were prepared, the titers of which were 1: 1024000 and 1: 128000, respectively. In this paper, the cross reaction between PEB1 antiserum and Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Lactobacillus bulgaricus, Shigella flexneri, CadF antiserum and denatured bacillus vulgaris, Vibrio parahaemolyticus were found by dot blot hybridization. Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and Bifidobacterium brevis have cross reactions. In this paper, ammonium octanoate precipitation method was used to remove the miscellaneous proteins in serum. Furthermore, the cross reaction of two antisera with the above microorganisms was eliminated by magnetic beads method, and high purity and high specificity antibodies were obtained. The results of this study will provide experimental materials for the establishment of immunological detection method for Campylobacter jejuni.
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R378

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10 王培鑫;潘存Z;陳黎勤;;腸道腺病毒、輪狀病毒、空腸彎曲菌的檢測[A];2006（第三屆）江浙滬兒科學術(shù)會議暨浙江省兒科學術(shù)年會論文匯編[C];2006年

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4 青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院 李海峰;格林-巴利不少見[N];健康報;2001年

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9 ;腹瀉用藥有學問[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2008年

10 保健時報記者 吳玲娟;格林-巴利綜合征不傳染[N];保健時報;2007年

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7 黃金林;我國部分地區(qū)雞源空腸彎曲菌流行病學及運送flaA基因的殼聚糖納米DNA疫苗免疫生物學特性研究[D];揚州大學;2008年

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9 鄭惠;空腸彎曲菌多價DNA疫苗的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2006年

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4 邢叢叢;空腸彎曲菌致急性周圍神經(jīng)病巴馬香豬模型初步建立[D];河北醫(yī)科大學;2011年

5 朱利;空腸彎曲菌質(zhì)粒研究初探[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2001年

6 趙哲;GBS相關(guān)空腸彎曲菌脂多糖抗體及其抗獨特型抗體的研究[D];河北醫(yī)科大學;2004年

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8 吳高林;空腸彎曲菌快速檢測方法建立和應用的研究[D];南京醫(yī)科大學;2007年

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