發(fā)布時間：2018-10-17 11:34

【摘要】：目的:探索以白細(xì)胞為免疫原的鼠抗人白細(xì)胞天然蛋白單克隆抗體(monoclonal antibodies,m Abs)制備與克隆篩選鑒定方法,制備鼠抗人S100A9天然蛋白單克隆抗體,并鑒定抗體性質(zhì)。方法:用健康人外周血白細(xì)胞免疫小鼠,利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備m Abs,通過免疫細(xì)胞化學(xué)法對雜交瘤細(xì)胞進行非特異性陽性篩選,有限稀釋法進行亞克隆,應(yīng)用免疫沉淀-質(zhì)譜法進行mAb特異性鑒定,通過Western blot進行細(xì)胞株篩選,小鼠體內(nèi)誘生腹水法制備單抗,親和層析法純化,ELISA間接法測定效價及親和力,Western blot進行特異性鑒定及交叉反應(yīng)性分析,免疫組化染色人乳腺癌石蠟切片。結(jié)果:獲得免疫細(xì)胞化學(xué)檢測陽性多克隆細(xì)胞35孔,分泌鼠抗人S100A9蛋白單克隆抗體細(xì)胞株11株,優(yōu)選1株制備腹水并純化鑒定抗體,抗體效價為1∶3.18×10~5,亞類為IgG1,輕鏈為kappa鏈,抗體純度達95%以上,親和力常數(shù)3.54×10~8L/mol,與S100A8的交叉反應(yīng)率為0.12%,與S100A12和S100A13幾乎無交叉反應(yīng),組化染色識別人乳腺癌組織中的S100A9蛋白。結(jié)論:成功制備鼠抗人S100A9天然蛋白單克隆抗體,該單抗具有高效價、較高親和力和高特異性,能為其應(yīng)用于免疫組化檢測S100A9蛋白的表達提供依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to investigate the preparation and clone screening of murine anti-human leukocyte natural protein monoclonal antibody (monoclonal antibodies,m Abs) with leukocyte as immunogen, to prepare mouse anti-human S100A9 natural protein monoclonal antibody and to identify its properties. Methods: the mice were immunized with peripheral white blood cells (PBWs) of healthy persons. M Abs, was prepared by using B lymphocyte hybridoma technique. The hybridoma cells were screened by immunocytochemistry and subcloned by limited dilution method. The specific mAb was identified by immunoprecipitation-mass spectrometry, the cell line was screened by Western blot, and the monoclonal antibody was prepared by inducing ascites in mice. Affinity chromatography was used to purify, ELISA indirect method was used to determine the titer and affinity of, Western blot for specific identification and cross-reactivity analysis, and paraffin sections of human breast cancer were stained with immunohistochemistry. Results: the immunocytochemical analysis showed that the positive polyclonal cells were 35 well, and 11 mouse anti-human S100A9 protein monoclonal antibody cell lines were secreted. One strain was selected to prepare ascites and to purify and identify the antibody. The antibody titer was 1: 3.18 脳 10 ~ (5), and the subclass was IgG1, light chain as kappa chain. The purity of the antibody was over 95%, the affinity constant was 3.54 脳 10 ~ (-1) L / mol, the cross-reaction rate with S100A8 was 0.12 and there was almost no cross-reaction with S100A12 and S100A13. The S100A9 protein in human breast cancer tissue was identified by histochemical staining. Conclusion: the monoclonal antibody against human S100A9 protein was successfully prepared. The monoclonal antibody has high titer, high affinity and high specificity. It can be used to detect the expression of S100A9 protein by immunohistochemistry.
【作者單位】： 河南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥免疫學(xué)實驗室/鄭州市抗體組學(xué)重點實驗室;河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物免疫學(xué)重點實驗室;
【基金】：2015年度河南省科技創(chuàng)新人才計劃(No.154100510019) 河南中醫(yī)學(xué)院創(chuàng)新團隊(No.2014XCXTD01);河南中醫(yī)學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)專項課題(No.2014KYYWF-ZZCX3-06)
【分類號】：R392

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本文編號：2276529