【摘要】：目的比較3種細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的檢測方法,分析優(yōu)缺點,篩選1種合適、準(zhǔn)確的檢測大鼠心肌細(xì)胞H9C2缺氧/復(fù)氧(H/R)模型中細(xì)胞內(nèi)活性氧的方法。方法培養(yǎng)H9C2細(xì)胞,選擇密度合適(80%~90%)的H9C2細(xì)胞進(jìn)行鋪板,加入2,7-雙乙酸二氯熒光素(DCFH-DA)熒光探針孵育,應(yīng)用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀及熒光酶標(biāo)儀3種方法檢測對照組(正常含氧量培養(yǎng)條件,CON)和實驗組(缺氧復(fù)氧處理,H/R6h)心肌細(xì)胞的熒光強度,從而反映大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,并利用數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果流式細(xì)胞儀檢測分析結(jié)果:對照組(152 690±34 104)FU/μg,實驗組(325 669±12 755)FU/μg;熒光酶標(biāo)儀檢測分析結(jié)果:對照組(282.3±12.57)FU/μg,實驗組(1 274±37.05)FU/μg。實驗組的ROS水平與對照組的ROS水平比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),實驗組高于對照組,而熒光顯微鏡觀察法無法定量地分析出實驗結(jié)果。結(jié)論 3種ROS檢測方法中,熒光酶標(biāo)儀檢測方法能更好地判斷大鼠心肌細(xì)胞H9C2活性氧水平。
[Abstract]:Objective to compare three methods for the detection of intracellular reactive oxygen species (ROS), analyze their advantages and disadvantages, and select a suitable and accurate method for the detection of intracellular reactive oxygen species (Ros) in rat cardiomyocytes with hypoxia / reoxygenation (H / R) model. Methods H9C2 cells were cultured, and H9C2 cells with suitable density (80%) were selected and incubated with fluorescein dichloroacetate (DCFH-DA) probe. The cells were incubated with fluorescence microscope. Flow cytometry (FCM) and fluorescence enzyme labeling (FCM) were used to detect the fluorescence intensity of cardiac myocytes in control group (normal oxygen content culture condition, CON) and experimental group (hypoxia reoxygenation, H/R6h), so as to reflect the level of reactive oxygen species (Ros) in rat cardiomyocytes. And use data analysis software for statistical analysis. Results the results of flow cytometry were (152,690 鹵34,104) FU/ 渭 g in the control group and (325,669 鹵12,755) FU/ 渭 g in the experimental group, and the results of fluorescence enzyme labeling were (282.3 鹵12.57) FU/ 渭 g in the control group and (1 274 鹵37.05) FU/ 渭 g in the experimental group. The level of ROS in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P0.05) compared with the ROS level of the control group, but the fluorescence microscope could not quantitatively analyze the results of the experiment. Conclusion among the three ROS detection methods, the fluorescent enzyme labeling method can better judge the level of H9C2 reactive oxygen species in rat cardiomyocytes.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院公共實驗技術(shù)中心;
【分類號】：R-332

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本文編號：2272839