發(fā)布時(shí)間：2018-10-10 18:52

【摘要】：研究目的： 脂肪組織缺氧是肥胖的早期表現(xiàn),與巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和局部炎癥相關(guān)。我們研究在缺氧環(huán)境中培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞,釋放促炎因子對(duì)巨噬細(xì)胞遷移以及骨骼肌胰島素作用的影響。 方法： 1.在21%O2,5%CO2(常氧)或1%O2,94%N2,5%CO2(缺氧)培箱中培養(yǎng)脂肪細(xì)胞,并提取條件培養(yǎng)基。 2. Real-time PCR測(cè)定缺氧脂肪細(xì)胞的脂肪因子的mRNA水平。 3. ELISA測(cè)定脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)基CM-H中TNFa、IL-6、MCP-1和脂聯(lián)素的水平。 4. Transwell系統(tǒng)觀察缺氧培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞的趨化作用。 5.偶聯(lián)抗體的吸光度分析法測(cè)定骨骼肌中GLUT4轉(zhuǎn)位。 6. Western Blot法測(cè)定胰島素信號(hào)分子的磷酸化水平。 7.熱滅活CM-H后檢測(cè)對(duì)骨骼肌細(xì)胞GLUT4轉(zhuǎn)位的影響。 8.中和抗體中和CM-H中MCP-1、IL-6后檢測(cè)對(duì)骨骼肌細(xì)胞作用的影響。 9.加入AMPK抑制劑Compound C后檢測(cè)其對(duì)骨骼肌細(xì)胞作用的影響。 結(jié)果： 1.3T3-L1脂肪細(xì)胞缺氧后缺氧誘導(dǎo)因子HIFla和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子GLUT1的蛋白表達(dá)升高。 2.缺氧脂肪細(xì)胞的TNFa, IL-6和MCP-1的mRNA表達(dá)增加,而脂聯(lián)素的mRNA表達(dá)降低。 3.CM-H中的TNFa, IL-6和MCP-1濃度增加,而脂聯(lián)素濃度降低。 4.在Transwell的共培養(yǎng)系統(tǒng)中,缺氧脂肪細(xì)胞比常氧脂肪細(xì)胞募集更多巨噬細(xì)胞。用中和抗體中和共培養(yǎng)系統(tǒng)中的MCP-1抑制巨噬細(xì)胞的遷移。 5.CM-H導(dǎo)致C2C12肌管基礎(chǔ)狀態(tài)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子GLUT4轉(zhuǎn)位增加而胰島素刺激的GLUT4轉(zhuǎn)位減少。 6.CM-H導(dǎo)致C2C12肌管中介導(dǎo)胰島素調(diào)節(jié)的GLUT4外排的兩個(gè)關(guān)鍵信號(hào)分子Akt和AS160磷酸化水平明顯降低。CM-H磷酸化JNK和S6K,并增加C2C12肌管細(xì)胞的IRS1絲氨酸磷酸化水平。 7.熱滅活CM-H中的細(xì)胞因子逆轉(zhuǎn)其對(duì)肌細(xì)胞GLUT4轉(zhuǎn)位的影響。 8.在CM-H中加入IL-6中和抗體,部分逆轉(zhuǎn)條件培養(yǎng)基造成的骨骼肌細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)GLUT4轉(zhuǎn)位及胰島素刺激的GLUT4轉(zhuǎn)位增加。 9.在CM-H中加入AMPK抑制劑Compound C,部分逆轉(zhuǎn)條件培養(yǎng)基對(duì)骨骼肌細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)GLUT4轉(zhuǎn)位及胰島素刺激的GLUT4轉(zhuǎn)位增加。 10.在CM-H中加入MCP-1中和抗體,部分逆轉(zhuǎn)條件培養(yǎng)基造成的骨骼肌細(xì)胞胰島素刺激的GLUT4轉(zhuǎn)位減少。 結(jié)論： 1.缺氧可以使脂肪細(xì)胞TNFα, IL-6和MCP-1表達(dá)與分泌增加,脂聯(lián)素的表達(dá)與分泌降低。 2.升高的趨化因子MCP-1可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞遷移。 3.CM-H造成骨骼肌細(xì)胞膜上基礎(chǔ)狀態(tài)GLUT4轉(zhuǎn)位增加而胰島素刺激的轉(zhuǎn)位減少,及骨骼肌細(xì)胞胰島素信號(hào)通路受損。 4.熱滅活可以逆轉(zhuǎn)CM對(duì)肌細(xì)胞GLUT4的轉(zhuǎn)位影響。. 5.IL-6可能通過(guò)AMPK磷酸化既參與CM-H造成的骨骼肌細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)GLUT4轉(zhuǎn)位增加和胰島素刺激的轉(zhuǎn)位增加。 6.MCP-1參與CM-H造成的骨骼肌細(xì)胞胰島素刺激的轉(zhuǎn)位減少。
[Abstract]:Objective: adipose tissue hypoxia is an early manifestation of obesity and is associated with macrophage infiltration and local inflammation. We investigated the effects of pro-inflammatory factor release on macrophage migration and skeletal muscle insulin in cultured adipocytes in anoxic environment. Methods: 1. The adipocytes were cultured in 21O _ 2 ~ (5) CO _ 2 (normoxic) or 1O _ (2) C _ (94) N _ (2) O _ (2) culture box, and the conditioned medium was 2. 2. Real-time PCR was used to measure the mRNA level of adipocyte adipocytes. The levels of TNFa,IL-6,MCP-1 and adiponectin in adipocyte conditioned medium CM-H were determined by ELISA. 4. 4. Transwell system was used to observe the chemotaxis of hypoxia-cultured adipocytes to macrophages. Spectrophotometric determination of GLUT4 translocation in skeletal muscle by coupling antibody. 6. 6. The phosphorylation level of insulin signaling molecules was determined by Western Blot method. Effects of heat inactivated CM-H on GLUT4 translocation of skeletal muscle cells. 8. 8. Effect of neutralizing antibody on skeletal muscle cells after neutralizing MCP-1,IL-6 in CM-H. 9. 9. The effect of AMPK inhibitor Compound C on skeletal muscle cells was detected. Results: the protein expression of hypoxia inducible factor HIFla and glucose transporter GLUT1 increased after hypoxia in 1.3T3-L1 adipocytes. 2. The mRNA expression of TNFa, IL-6 and MCP-1 in anoxic adipocytes was increased, while the mRNA expression of adiponectin was decreased, TNFa, IL-6 and MCP-1 in 3.CM-H were increased, and adiponectin was decreased. In the co-culture system of Transwell, anoxic adipocytes recruit more macrophages than normoxic adipocytes. MCP-1 in neutralizing co-culture system with neutralizing antibody inhibited the migration of macrophages. 5.CM-H increased the translocation of glucose transporter GLUT4 in the basic state of the C2C12 myotube and decreased the GLUT4 translocation stimulated by insulin. 6.CM-H induced the translocation of macrophages. The phosphorylation levels of Akt and AS160, two key signaling molecules of insulin-mediated GLUT4 efflux in C2C12 myotubes, were significantly decreased, while CM-H phosphorylation of JNK and S6K increased IRS1 serine phosphorylation level of C2C12 myotube cells. The effect of cytokines in heat inactivated CM-H on GLUT4 transposition of myocytes was reversed. 8. 8. When IL-6 neutralizing antibody was added to CM-H, partial reversal of GLUT4 translocation induced by conditioned medium and insulin stimulated GLUT4 translocation increased. When AMPK inhibitor Compound C was added to CM-H, partial reverse conditioned medium increased GLUT4 translocation and insulin stimulated GLUT4 translocation in skeletal muscle cells. When MCP-1 neutralizing antibody was added to CM-H, the GLUT4 translocation induced by insulin stimulation in skeletal muscle cells was partly reversed by conditioned medium. Conclusion: 1. Hypoxia can increase the expression and secretion of TNF 偽, IL-6 and MCP-1 in adipocytes, and decrease adiponectin expression and secretion. 2. Increased chemokine MCP-1 could promote macrophage migration to adipocytes. 3.CM-H increased basal GLUT4 translocation and decreased insulin-stimulated translocation in skeletal muscle cell membrane. Damage of insulin signaling pathway in skeletal muscle cells. 4. 4. Heat inactivation can reverse the effect of CM on GLUT4 translocation of myocytes. 5.IL-6 may be involved in the increase of GLUT4 translocation and insulin stimulation translocation of skeletal muscle cells induced by CM-H through AMPK phosphorylation. The translocation of insulin stimulation in skeletal muscle cells caused by CM-H was reduced.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329.2

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Jinshan ZHAO;Ke JIANG;Zhenghao DAI;Xiaoli REN;Yumei WANG;Yongping JIANG;Mingtuan LIU;Yonglian DAI;Lele HOU;Hegang LI;;Advances in Mathematical Modeling of NFκB Signal Transduction in Mammals[J];Agricultural Biotechnology;2013年04期

2 王延玲;尹強(qiáng);王榮;謝華;李文斌;賈正平;武曉玉;張娟紅;;不同海拔缺氧對(duì)大鼠心肌HIF-1α的影響研究[J];高原醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

3 栗莉;張艷;;Toll樣受體4與肥胖個(gè)體胰島素抵抗的研究進(jìn)展[J];腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng);2013年06期

4 唐莉;左嬋;隗伏冰;;妊娠期糖尿病胎兒相關(guān)指標(biāo)與脂聯(lián)素關(guān)系的研究[J];婦產(chǎn)與遺傳(電子版);2013年03期

5 趙海燕;楊少娟;馬永平;王彥芳;;甘草黃酮對(duì)2型糖尿病大鼠骨骼肌中PPARγ蛋白的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年21期

6 暴素青;曹艷麗;張樂(lè);張媛媛;單忠艷;滕衛(wèi)平;;表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)高脂飲食大鼠脂肪組織TNF-α表達(dá)的影響及意義[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2013年06期

7 趙晶蕾;江凌勇;房兵;;叉頭框蛋白O1在骨改建中的作用[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年02期

8 鮑斌;林燕;薛薏;;小鼠p300-HAT真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年27期

9 張鵬;汪南平;;脂肪因子與代謝綜合征[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2006年01期

10 陳雨;鄭少雄;郝杰;孟春梅;;白介素6在2型糖尿病大鼠胰島素抵抗中的作用[J];中國(guó)臨床醫(yī)學(xué);2011年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 Mary Kaileh;Ranjan Sen;;Role of NF-κB in the Anti-Inflammatory Effects of Tocotrienols[A];Journal of the American College of Nutrition（Volume29，，Number3（s），June2010）[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 高春林;高糖、高游離脂肪酸、UCP4影響脂肪細(xì)胞胰島素敏感性的線粒體機(jī)制分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 高丹;NADPH氧化酶3源性活性氧在游離脂肪酸誘導(dǎo)的肝臟胰島素抵抗發(fā)生中的作用機(jī)理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

3 時(shí)麗麗;丹酚酸A、黃連堿對(duì)糖代謝的作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 魏媛媛;石榴花多酚對(duì)糖尿病大鼠血糖血脂的影響及其作用機(jī)制的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

5 王珍;炎癥和免疫相關(guān)因子與糖尿病及糖尿病前期的關(guān)系[D];蘇州大學(xué);2011年

6 陳寶瑩;低氧及氧化應(yīng)激對(duì)脂肪細(xì)胞分泌因子表達(dá)的調(diào)節(jié)及其機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 季少平;幾種PH結(jié)構(gòu)域與蛋白激酶C相互作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1999年

8 李昕;PPARγ及apM1基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征肥胖異質(zhì)性的相關(guān)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

9 馬毅;中藥小檗堿、薯蕷皂甙對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞糖代謝及胎盤激素分泌的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2007年

10 白震民;針刺干預(yù)胰島素抵抗模型大鼠胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中GLUT4和Akt2 mRNA表達(dá)的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張瑩;2型糖尿病患者chemerin水平變化與下肢血管病變的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2011年

2 雷雨;p38MAPK信號(hào)通路在肌源性IL-6抑制胰島素抵抗發(fā)生的作用研究[D];湖南科技大學(xué);2011年

3 劉莉;1.tmTNF-α改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗及其分子機(jī)制 2.TNF-α保守序列突變體的構(gòu)建及改構(gòu)TNFRBP三聚體化研究[D];華中科技大學(xué);2011年

4 丁勝利;肥胖大鼠脂肪組織基因表達(dá)譜特征的研究及差異表達(dá)基因功能的初步分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

5 李慧;從胰島素抵抗鼠NO、ET-1水平的變化探索血管內(nèi)皮細(xì)胞的改變[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2003年

6 張麗;TNF-α、IL-6與2型糖尿病和糖尿病神經(jīng)病變相關(guān)性的研究[D];浙江大學(xué);2004年

7 王妮娜;蟲草菌絲對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠血糖、血清胰島素水平以及肝腎組織形態(tài)的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

8 陽(yáng)柳雪;老年糖耐量低減患者血清sTNFR水平與胰島素抵抗關(guān)系的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2004年

9 張愛(ài)萍;不同糖代謝狀態(tài)下血清TNFα和FFA的變化及其意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2005年

10 宋春紅;胰島素抵抗大鼠外周血白細(xì)胞胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子mRNA的表達(dá)及氨基胍的保護(hù)機(jī)制[D];山東大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2262870