【摘要】：研究背景與目的：終末期肝病嚴(yán)重危害人類健康,肝移植被認(rèn)為是治療終末期肝病最有效的方法,但因肝源、費(fèi)用及抗排斥藥物的不良反應(yīng)等問題受到限制。干細(xì)胞移植治療終末期肝病作為一種新方法顯示出良好的應(yīng)用前景。骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)具有極強(qiáng)的自我復(fù)制能力和多向分化潛能,且低免疫源性,有望成為治療終末期肝病的一種新型種子細(xì)胞。目前實驗研究認(rèn)為BMSCs參與受損肝組織的修復(fù),但機(jī)制尚不明確,是否為多數(shù)研究者認(rèn)為的干細(xì)胞跨胚層分化?目前國內(nèi)外已有研究將干細(xì)胞移植治療終末期肝病應(yīng)用于臨床,獲得了一定療效,但目前移植效率的問題,如移植途徑是否影響移植效率,目前尚不清楚。因此本課題基上述兩個問題,將采用體外誘導(dǎo)實驗明確BMSCs是否可向肝樣細(xì)胞分化,為體內(nèi)干細(xì)胞移植治療肝病終末期提供實驗依據(jù)。借助動物模型經(jīng)門靜脈、外周靜脈移植BMSCs,分析其定植情況及對肝功能的影響,明確兩途徑對干細(xì)胞治療肝病療效的影響,為臨床研究提供實驗基礎(chǔ)。 方法：(1)本研究采用密度梯度離心法和貼壁細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)傳代獲得純化的BMSCs。(2)將純化后的BMSCs在肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor HGF)和成纖維生長因子-4(basic fibroblast factor FGF-4)的作用下進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)后,免疫細(xì)胞化學(xué)檢測肝細(xì)胞表面標(biāo)志物白蛋白、甲胎蛋白、角蛋白18的表達(dá),明確BMSCs是否可分化為肝樣細(xì)胞。(3)將CC14輪替注射大鼠四肢內(nèi)側(cè)皮下,建造肝硬化大鼠模型。將GFP標(biāo)記后的BMSCs經(jīng)外周靜脈、門靜脈移植入肝硬化模型大鼠體內(nèi),熒光顯微鏡檢測干細(xì)胞在肝內(nèi)的定植情況,檢測血清肝功能及免疫組化檢測肝組織白蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)采用密度梯度離心法和貼壁細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)法分離的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞純度高,體外培養(yǎng)增殖能力活躍。(2)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)HGF和FGF-4共誘導(dǎo)培養(yǎng)共28天,分別在14天、21天、28天免疫細(xì)胞化學(xué)檢測肝細(xì)胞標(biāo)志物。隨著誘導(dǎo)時間延長,白蛋白及角蛋白18表達(dá)陽性率逐漸增加,甲胎蛋白表達(dá)逐漸降低。未誘導(dǎo)組白蛋白、角蛋白、甲胎蛋白表達(dá)陰性。(3)HE及Masson染色顯示肝硬化大鼠模型建立成功。體外分離培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)攜帶綠色熒光蛋白的慢病毒轉(zhuǎn)染后在熒光顯微鏡下可見綠色熒光蛋白的表達(dá)。經(jīng)門靜脈及外周靜脈移植BMSCs28天后,兩移植組大鼠肝臟組織切片均可見散在的綠色熒光蛋白陽性細(xì)胞,表明BMSCs移植后能定植于肝硬化大鼠模型體內(nèi)。實驗組各肝功能指標(biāo)ALB、ALT、AST均隨時間變化逐漸好轉(zhuǎn),門靜脈實驗組與其對照組比較各肝功能指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,尾靜脈實驗組與其對照組比較各肝功能指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,兩實驗組之間比較各肝功能指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。免疫組化檢測肝組織白蛋白表達(dá),門靜脈實驗組與其對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,尾靜脈實驗組和對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,兩實驗組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外可分化成為肝樣細(xì)胞； 2.經(jīng)尾靜脈、門靜脈移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能定植于大鼠受損的肝臟內(nèi),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可在一定程度上改善肝功能； 3.尾靜脈、門靜脈移植干細(xì)胞治療肝病的效率無差別。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 武楠;劉峰;馬慧;劉志達(dá);費(fèi)然;陳紅松;王豪;魏來;;終末期肝病患者乙型肝炎病毒感染與肝祖細(xì)胞激活的關(guān)系[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年02期

2 王方;張俊;周一鳴;張曉崗;白海;印建國;張靜;;自體骨髓干細(xì)胞移植治療終末期肝病15例療效觀察[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年01期

3 梁峗磊;邢卉春;;終末期肝病病情預(yù)后判斷模式的演變及評價[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年02期

4 袁晟光;農(nóng)卡特;廖維甲;覃理靈;王莉;;肝硬化大鼠肝部分切除后IL-6/STAT3信號通路的變化[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年22期

5 歐志穗;劉友章;陳裕杲;;健脾益肝方對肝硬化大鼠AQP8的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2011年07期

6 黃偉彪;成官迅;;原發(fā)性肝癌治療后的影像學(xué)評價[J];醫(yī)學(xué)信息(上旬刊);2011年09期

7 郭曉東;熊璐;楊坤;丁寧;郝曉剛;吉英杰;田如意;孫婷;;阿德福韋酯聯(lián)合乙肝免疫球蛋白預(yù)防HBV相關(guān)性終末期肝病肝移植術(shù)后復(fù)發(fā)的臨床研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年11期

8 周紅宇;周國華;;一氧化氮和內(nèi)毒素在肝硬化并發(fā)癥發(fā)病中的機(jī)制及益生菌的干預(yù)作用研究進(jìn)展[J];疑難病雜志;2011年07期

9 胡萍;楊福秀;劉霞;;肝硬化失代償期患者行自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植術(shù)治療的護(hù)理[J];吉林醫(yī)學(xué);2011年26期

10 敖s，

本文編號：2257113