【摘要】：[目的]構建帶his標簽的人p52Shc1基因真核表達載體,并根據(jù)其生物學活性進行鑒定。[方法]采用PCR技術以Shc1 cDNA基因為模板擴增Shc1基因,將其插入pEnter載體構建pEnter-p52shc1重組質粒,將重組質粒與空載體分別轉入293T細胞,利用Western Blot檢測p52Shc1表達情況,并使用cck-8法繪制細胞生長曲線。[結果]通過雙酶切獲得2條與目的基因大小相符的片段,測序結果顯示符合率為100%,Western Blot結果顯示在52 kDa大小處出現(xiàn)清晰單一條帶,cck-8法繪制的細胞生長曲線顯示,轉染重組質粒pEnter-p52Shc1的細胞生長速率明顯大于轉染pEnter空載的細胞(P0.01)。[結論]成功構建帶his標簽的人p52Shc1基因真核表達載體并在293T細胞中成功表達,轉染重組質粒并表達p52Shc1蛋白的293T細胞的增值速率明顯提高。
[Abstract]:[objective] to construct the eukaryotic expression vector of human p52Shc1 gene with his tag and to identify its biological activity. [methods] the Shc1 gene was amplified by PCR and inserted into pEnter vector to construct pEnter-p52shc1 recombinant plasmid. The recombinant plasmid and empty vector were transferred into 293T cells respectively. P52Shc1 expression was detected by Western Blot. Cck-8 method was used to draw cell growth curve. [results] two fragments were obtained by double enzyme digestion. The result of sequencing showed that the coincidence rate was 100%. The results of Western Blot showed that there was a clear cell growth curve drawn by single band cck-8 method at the size of 52 kDa. The growth rate of cells transfected with recombinant plasmid pEnter-p52Shc1 was significantly higher than that without pEnter transfection (P0.01). [conclusion] the eukaryotic expression vector of human p52Shc1 gene with his tag was successfully constructed and expressed in 293T cells. The proliferation rate of 293T cells transfected with recombinant plasmid and expressed p52Shc1 protein was significantly increased.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學檢驗與生物技術學院抗體工程研究所;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(“羊口瘡病毒ORFV118蛋白調控宿主細胞凋亡的分子機制研究”,No.31672536) 廣州市科技計劃項目(“產(chǎn)前快速診斷自動化設備及其創(chuàng)新型試劑的開發(fā)”,No.201604010046;“系列全自動管式化學發(fā)光免疫檢測試劑盒及配套設備的產(chǎn)業(yè)化”,No.201604040003)
【分類號】：R3416

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本文編號：2256095