【摘要】：納米金由于獨(dú)特的光學(xué)特性近年來備受關(guān)注。納米粒子表面等離子共振產(chǎn)生的吸收、散射成為研究的熱點(diǎn),在許多領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。納米金溶液顏色及等離子共振吸收峰與納米金顆粒的形狀、大小及分散性有關(guān)。單分散性較好的納米金溶液為酒紅色,在510-550 nm可見光范圍內(nèi)有吸收峰,而聚集態(tài)的納米金表面等離子共振吸收峰會(huì)發(fā)生紅移,溶液顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色或紫色。由于方法簡單、實(shí)驗(yàn)耗資較低、操作過程直接,近些年出現(xiàn)了一些新的基于色度分析的納米金傳感器。利用納米金分散狀態(tài)改變引起的表面等離子共振吸收的變化可以檢測多種金屬離子及DNA、蛋白質(zhì)等生物分子。 朊蛋白(PrP)是一類特殊的病原體,可以引起哺乳動(dòng)物多種致命性神經(jīng)退行性疾病,例如牛海綿樣腦病(BSE)、羊搔癢癥、人類克雅氏病(CJD)及近來研究的其他神經(jīng)退行性綜合癥,如庫魯病。朊蛋白疾病的產(chǎn)生方式有感染、遺傳、或散發(fā)病癥。研究表明宿主編碼的非傳染性細(xì)胞朊蛋白(PrPc)發(fā)生構(gòu)象變化,轉(zhuǎn)化成具有傳染性的模式(Prpsc),是這類疾病的發(fā)病機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)研究表明PrPc大量存在于多數(shù)神經(jīng)系統(tǒng)的組織中,在細(xì)胞代謝、抗氧化、神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮一定的作用。發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)化后,朊蛋白的生物化學(xué)和物理化學(xué)性質(zhì)發(fā)生改變,例如不溶解性、聚集、富含β折疊二級(jí)結(jié)構(gòu)及抗蛋白酶降解。超微結(jié)構(gòu)分析得出淀粉樣纖維直徑在7-10 nm,淀粉樣纖維結(jié)構(gòu)高分辨率的研究揭示β折疊結(jié)構(gòu)的形成。盡管物種障礙對朊蛋白在物種間傳遞提供了重要的保護(hù),但是BSE感染的牛導(dǎo)致的人類變異型克雅氏病(vCJD)及BSE疾病的爆發(fā)說明朊蛋白對人類具有潛在的影響。即使是當(dāng)前最先進(jìn)的檢測方法例如熒光免疫分析、酶聯(lián)免疫分析、放射性免疫分析(RIA)、或蛋白錯(cuò)誤折疊循環(huán)放大(PMCA)也難以檢測牛、人類或血庫中朊蛋白的存在。因此,對羊搔癢癥、BSE或CJD疾病的確定仍舊依賴于可疑個(gè)體死后變性組織的成像分析,這常常產(chǎn)生延遲反應(yīng),可能導(dǎo)致流行病的爆發(fā)并造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。所以,發(fā)展一種能夠檢測或診斷感染動(dòng)物血液或血清中朊蛋白的技術(shù),對防止疾病的傳播具有重要意義。本論文的主要研究工作如下： (1)以二巰基辛酸修飾的納米金(DHLA-AuNPs)為探針,無標(biāo)記法檢測朊蛋白。以重組人朊蛋白(rPrP)為纖維化蛋白的模型,研究了朊蛋白誘導(dǎo)的DHLA-AuNPs粒子的聚集及DHLA-AuNPs粒子對朊蛋白纖維化的影響。以DHLA-AuNPs為探針與朊蛋白發(fā)生作用,通過DHLA-AuNPs溶液吸光度值降低和朊蛋白濃度的線性關(guān)系定量檢測朊蛋白。調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件,加入NaCl,檢測的靈敏度顯著升高。利用DHLA-AuNPs探針分別檢測了表達(dá)朊蛋白的大腸桿菌裂解液中和胎牛血清中朊蛋白的含量。通過電子顯微鏡成像表征發(fā)現(xiàn)朊蛋白誘導(dǎo)的納米金沉淀中存在蛋白質(zhì)纖維,說明DHLA-AuNPs粒子的聚集和加入的朊蛋白的纖維化過程有關(guān)。 (2)利用一種朊蛋白適配體功能化納米金(APT-AuNPs),得到可以選擇性識(shí)別朊蛋白的納米金�；谶m配體和朊蛋白的特異性結(jié)合作用,建立了一種適配體功能化的納米金探針檢測朊蛋白的方法。通過選擇性和共存干擾實(shí)驗(yàn)證實(shí),適配體功能化的納米金檢測朊蛋白具有極好的選擇性。 (3)以兩種朊蛋白適配體分別功能化檸檬酸鈉包裹的納米金�；趦煞N適配體和朊蛋白的特異性結(jié)合作用進(jìn)行朊蛋白的定量檢測,在相同的靈敏度下顯著提高了檢測的線性范圍,同時(shí)得到了有序組裝的納米金顆粒。
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【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R341

【參考文獻(xiàn)】

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1 肖賽金;基于配體的朊病毒蛋白分析新方法[D];西南大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：2255811