【摘要】：研究背景：B細胞活化因子（B cell activating factor belonging to theTNF family，BAFF）是TNF家族的成員之一，它是B淋巴細胞表達的重要致炎因子，BAFF的過表達與多種疾病（如白血病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等）的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。因此抑制BAFF的表達和/或相關(guān)的生物學(xué)功能，對BAFF相關(guān)疾病的防治具有重要的意義。核受體超家族成員肝X受體（liver X receptor，LXR）是典型的核受體。作為一個多功能轉(zhuǎn)錄因子,其可通過調(diào)控諸多靶基因的表達而發(fā)揮調(diào)節(jié)代謝和抗腫瘤功能。近年研究表明，抗炎作用是LXR的一項新功能，但其抗炎機制還亟待闡明；尤其是關(guān)于LXR是否可通過下調(diào)BAFF來發(fā)揮抗炎作用，目前未見報道。闡明該問題，將為深入揭示LXR的抗炎機制積累新的理論資料，乃至為探索以BAFF為靶點防治炎癥的新措施提供科學(xué)依據(jù)。 研究目的：探討LXR對BAFF表達的影響及其機制。 研究方法及結(jié)果：選取人B淋巴細胞系的Namalwa細胞和Daudi細胞為模型，用LXR的特異性激動劑GW3965處理24h后，，經(jīng)RT-PCR和Real-time PCR技術(shù)證實LXR可在轉(zhuǎn)錄水平上抑制BAFF的表達；Western blot檢測顯示LXR可在蛋白水平上抑制BAFF的表達。熒光素酶報告基因檢測實驗證實LXR可抑制BAFF基因啟動子的轉(zhuǎn)錄活性，且該抑制作用與BAFF基因啟動子區(qū)的-1082～-361區(qū)域關(guān)系密切。經(jīng)電泳遷移阻滯實驗(Electrophoresis mobility shift，EMSA)實驗和染色質(zhì)免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay，ChIP)實驗證實，LXR可抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的結(jié)合活性，提示LXR可能通過負性調(diào)節(jié)NF-κB信號通路來抑制BAFF的表達。用LXR的特異性激動劑GW3965灌胃喂養(yǎng)小鼠一周后，取脾臟經(jīng)RT-PCR和Western blot檢測，證實LXR可下調(diào)小鼠脾臟組織中BAFF的表達。 結(jié)論：LXR激動劑處理B淋巴細胞系后可使BAFF mRNA和蛋白的表達呈劑量依賴性降低，且該下調(diào)作用的可能機制是抑制了NF-κB信號通路。動物實驗顯示LXR可在小鼠體內(nèi)下調(diào)BAFF的表達。
[Abstract]:Background: (B cell activating factor belonging to theTNF family,BAFF, a member of the TNF family, is a member of the TNF family. It is an important inflammatory factor in the expression of B lymphocytes and is associated with many diseases such as leukemia. Rheumatoid arthritis (RA) is closely related to development. Therefore, the inhibition of BAFF expression and / or related biological functions is of great significance in the prevention and treatment of BAFF related diseases. Liver X receptor (liver X receptor,LXR, a member of the nuclear receptor superfamily, is a typical nuclear receptor. As a multifunctional transcription factor, it can regulate metabolism and antitumor function by regulating the expression of many target genes. Recent studies have shown that the anti-inflammatory effect is a new function of LXR, but its anti-inflammatory mechanism needs to be clarified, especially whether LXR can play an anti-inflammatory effect by down-regulating BAFF, which has not been reported at present. The elucidation of this problem will provide a scientific basis for further revealing the anti-inflammatory mechanism of LXR and for exploring new measures to prevent and treat inflammation with BAFF as its target. Objective: to investigate the effect of LXR on BAFF expression and its mechanism. Methods and results: Namalwa cells and Daudi cells of human B lymphocytes were selected as models. After treated with LXR specific agonist GW3965 for 24 hours, RT-PCR and Real-time PCR techniques confirmed that LXR could inhibit the expression of BAFF at the transcriptional level. Western blot analysis showed that LXR could inhibit the expression of BAFF at protein level. The detection of luciferase reporter gene confirmed that LXR could inhibit the transcriptional activity of BAFF gene promoter, and the inhibitory effect was closely related to the region of -1082 ~ (-1) -361 in the promoter region of BAFF gene. Electrophoretic migration arrest assay (Electrophoresis mobility shift,EMSA) and chromatin immunoprecipitation (Chromatin immunoprecipitation assay,ChIP) assay confirmed that LXR could inhibit the binding activity of transcription factor NF- 魏 B, suggesting that LXR may inhibit BAFF expression by negatively regulating NF- 魏 B signaling pathway. Mice were fed with GW3965, a specific agonist of LXR, for one week. RT-PCR and Western blot assays showed that LXR could down-regulate the expression of BAFF in spleen of mice. Conclusion the expression of BAFF mRNA and protein decreased in a dose-dependent manner after the treatment of B lymphocyte cell line with the agonist of 1: LXR, and the mechanism of this downregulation may be the inhibition of NF- 魏 B signaling pathway. Animal experiments showed that LXR could down-regulate the expression of BAFF in mice.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392.1

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本文編號：2249128