發(fā)布時間：2018-09-17 15:14

【摘要】：目的：：觀察攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的tet-on慢病毒載體對人臍帶間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)染表達及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后成骨的影響。 方法：取第3代人臍帶間充質(zhì)干細胞分組培養(yǎng)：實驗組穩(wěn)定轉(zhuǎn)染攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的tet-on慢病毒載體,并加入10m/L強力霉素；未加強力霉素組：同實驗組但不加強力霉素；空病毒組轉(zhuǎn)染攜帶綠色熒光蛋白的慢病毒載體；空白對照組未進行任何處理。 結(jié)果：①骨形態(tài)發(fā)生蛋白2表達：實驗組、未加強力霉素組均有表達,且實驗組表達量高于未加強力霉素組(P0.05)；空病毒組、空白對照組未見表達。②堿性磷酸酶染色：實驗組可見細胞胞漿中出現(xiàn)大量紅色或紅棕色顆粒,未加強力霉素組可見少量紅色顆粒,實驗組堿性磷酸酶活性高于未加強力霉素組(P0.05)；空病毒組、空白對照組未見明顯紅色顆粒。③茜素紅染色：實驗組、未加強力霉素組均可見鈣結(jié)節(jié)形成,實驗組較未加強力霉素組礦化結(jié)節(jié)數(shù)量多,面積更大；空病毒組、空白對照組未見明顯礦化結(jié)節(jié)形成。 結(jié)論：攜帶hBMP-2的tet-on慢病毒載體成功轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細胞,并可獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HUCMSCs。強力霉素可使穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HUCMSCs的hBMP-2表達量顯著升高,成骨能力顯著增強,為進一步研究hBMP-2誘導HUCMSCs成骨分化治療骨壞死和骨缺損奠定實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of tet-on lentivirus vector carrying bone morphogenetic protein 2 on the expression of human umbilical cord mesenchymal stem cells and osteogenesis after stable transfection. Methods: the third generation of human umbilical cord mesenchymal stem cells were cultured in groups: the tet-on lentivirus vector carrying bone morphogenetic protein 2 was transfected stably in the experimental group, and the 10m/L doxycycline was added to the lentivirus vector, and the doxycycline group was not added with doxycycline in the same experimental group. The empty virus group transfected the lentivirus vector carrying green fluorescent protein, and the blank control group was not treated. Results the expression of bone morphogenetic protein-2 in the experimental group was higher than that in the doxycycline group (P0.05), and the expression level in the control group was higher than that in the control group (P0.05). In the blank control group, the expression of .2 alkaline phosphatase was not observed. In the experimental group, a large number of red or red-brown granules were found in the cytoplasm of the cells, and a few red granules were observed in the group without doxycycline. The activity of alkaline phosphatase in the experimental group was higher than that in the group without doxycycline (P0.05); in the empty virus group, there was no obvious red particle alizarin red staining in the blank control group. The number and area of mineralized nodules in the experimental group were more than those in the control group, while in the empty virus group, there were no obvious mineralized nodules in the blank control group. Conclusion: tet-on lentivirus vector carrying hBMP-2 was successfully transfected into human umbilical cord mesenchymal stem cells, and stable transfection of HUCMSCs. could be obtained. Doxycycline could significantly increase the expression of hBMP-2 and enhance the osteogenic ability of stable transfected HUCMSCs, which laid the experimental foundation for the further study of osteogenic differentiation of HUCMSCs induced by hBMP-2 in the treatment of osteonecrosis and bone defect.
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329

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