【摘要】：人類免疫缺陷病毒(HIV)感染人類所導(dǎo)致的獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome,即AIDS)已經(jīng)在全球范圍內(nèi)流行了30余年,但是迄今為止尚未找到能夠徹底清除病毒感染并治愈AIDS的方法。本課題組主要致力于治療性艾滋病疫苗(Therapeutic HIV vaccine)的研究,導(dǎo)師曾毅院士在國內(nèi)外首次提出HIV多載體疫苗序貫重復(fù)免疫的策略,并在小鼠及恒河猴實(shí)驗(yàn)中證實(shí)該策略能誘導(dǎo)較強(qiáng)而且持久的HIV特異性細(xì)胞免疫反應(yīng),提示該策略有很好的應(yīng)用前景。另外,基于樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells,DCs)的HIV疫苗在臨床前和臨床研究中都顯示可有效控制病毒載量,我們擬在多載體疫苗序貫重復(fù)免疫的策略中增加這種DCs疫苗的應(yīng)用。本研究目的是在前期研究的基礎(chǔ)上,構(gòu)建新的表達(dá)不同亞型基因候選艾滋病疫苗并進(jìn)行免疫原性評價(jià);同時(shí)也對負(fù)載Ad5-HIVgag/env的DC疫苗進(jìn)行免疫原性評價(jià)為后期進(jìn)一步進(jìn)行包括上述各種疫苗在內(nèi)的多載體疫苗聯(lián)合免疫方案的優(yōu)化奠定基礎(chǔ)。本研究主要包括三部分,首先對表達(dá)HIV-1 CRF01_AE亞型gp145和gp160基因的DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫原性進(jìn)行了比較,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,表達(dá)gp145和gp160基因的DNA疫苗都能夠誘導(dǎo)抗原特異性免疫反應(yīng),反應(yīng)峰值分別出現(xiàn)在免疫后3w和4w,表達(dá)gp145基因的DNA疫苗免疫后誘導(dǎo)的HIV特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)更快達(dá)到峰值,pVR-AE gp145在小鼠體內(nèi)的免疫原性明顯優(yōu)于pVR-AE gp160,在后續(xù)研究中將選擇pVR-AE gp145疫苗與其他載體疫苗進(jìn)行聯(lián)合免疫的進(jìn)一步評價(jià)。其次,構(gòu)建了表達(dá)HIV-1 B/C亞型gag基因的重組腺病毒疫苗(rAd5-HIV B/C gag),并對其在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)進(jìn)行了初步研究。ELISPOT結(jié)果顯示,rAd5-HIV B/C gag免疫2周后,在小鼠內(nèi)檢測到了高水平的Gag特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答。此外,還在小鼠體內(nèi)評價(jià)了負(fù)載Ad5-HIV gag/env的DCs疫苗的免疫原性。首先用貼壁法分離純化BALB/c小鼠DCs,并通過細(xì)胞因子誘導(dǎo)DC細(xì)胞成熟后,采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定DC純度。利用重組腺病毒Ad5-HIV gag/env感染DC細(xì)胞,制備DC疫苗,并用所制備的DC疫苗單獨(dú)或聯(lián)合免疫小鼠,在免疫后的不同時(shí)間點(diǎn),用ELISPOT方法檢測小鼠體內(nèi)HIV特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答強(qiáng)度。結(jié)果顯示,Ad5-HIV gag/env負(fù)載的樹突狀細(xì)胞疫苗可以在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)較強(qiáng)的HIV特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)。上述的DNA疫苗,Ad5疫苗和負(fù)載Ad5-HIVgag/env的DC疫苗都有很好的免疫原性,為進(jìn)一步評價(jià)這些疫苗在小鼠體內(nèi)序貫、重復(fù)免疫的效果奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) caused by human immunodeficiency virus (HIV) infection has been prevalent in the world for more than 30 years, but no method has been found to completely eliminate the virus infection and cure AIDS. Our research group is mainly devoted to the research of therapeutic AIDS vaccine (Therapeutic HIV vaccine). Academician Zeng Yi proposed the strategy of sequential repeated immunization of HIV multi-carrier vaccine for the first time at home and abroad. The results of experiments in mice and rhesus monkey showed that the strategy could induce strong and persistent HIV specific cellular immune response, which indicated that the strategy had a good application prospect. In addition, HIV vaccine based on dendritic cells (Dendritic Cells,DCs) has been shown to be effective in controlling viral load in both clinical and clinical studies. We intend to increase the application of this DCs vaccine in the strategy of sequential repeated immunization of multi-vector vaccines. The aim of this study was to construct a new candidate AIDS vaccine expressing different subtypes of genes and evaluate its immunogenicity on the basis of previous studies. At the same time, the immunogenicity evaluation of the DC vaccine loaded with Ad5-HIVgag/env laid the foundation for further optimization of the multi-vector vaccine combined immunization scheme, including the above-mentioned vaccines. This study mainly consists of three parts. Firstly, the immunogenicity of the DNA vaccine expressing HIV-1 CRF01_AE subtype gp145 and gp160 gene in mice was compared. Both DNA vaccines expressing gp145 and gp160 genes can induce antigen-specific immune responses. The peak value of the response occurred at 3w and 4ws after immunization, respectively. The immunogenicity of HIV specific cellular immune response induced by DNA vaccine expressing gp145 gene was faster than that of pVR-AE gp160, in mice after immunization. The immunogenicity of pVR-AE gp145 in mice was significantly better than that of pVR-AE gp160, in the follow-up study. PVR-AE gp145 vaccine and other vector vaccines will be selected for further evaluation of combined immunization. Secondly, the recombinant adenovirus vaccine (rAd5-HIV B / C gag),) expressing HIV-1 B / C subtype gag gene was constructed and the immune response induced by rAd5-HIV B / C gag), in mice was studied. The results showed that rAd5-HIV B / C gag was immunized for 2 weeks. A high level of Gag specific cellular immune response was detected in mice. In addition, immunogenicity of DCs vaccine loaded with Ad5-HIV gag/env was evaluated in mice. The DCs, of BALB/c mice was isolated and purified by adherent method. After the DC cells matured by cytokines, the purity of DC was identified by flow cytometry. The recombinant adenovirus Ad5-HIV gag/env was used to infect DC cells to prepare DC vaccine. Mice were immunized with the DC vaccine alone or in combination. The specific cellular immune response of HIV in mice was detected by ELISPOT method at different time points after immunization. The results showed that the dendritic cell vaccine loaded with Ad5-HIV gag/env could induce a strong HIV specific cellular immune response in mice. The above DNA vaccine, Ad5 vaccine, and DC vaccine loaded with Ad5-HIVgag/env have good immunogenicity, which lays a foundation for further evaluation of the sequential and repeated immunization effect of these vaccines in mice.
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392

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本文編號：2244066